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转录因子MdHB1调控澳洲青苹苹果花青苷合成的分子机制研究

摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第一章 文献综述第13-23页
    1.1 花青苷的生物合成第13-16页
    1.2 MYB-bHLH-WD40(MBW)转录因子对花青苷合成调控的研究第16-18页
        1.2.1 MYB转录因子第17页
        1.2.2 bHLH转录因子第17-18页
        1.2.3 WD40转录因子第18页
    1.3 其他转录因子对花青苷合成调控的研究第18-19页
    1.4 HD-Zip转录因子的研究进展第19-22页
        1.4.1 HD-Zip转录因子家族分类第19-20页
        1.4.2 HD-Zip Ⅰ转录因子的研究进展第20-21页
        1.4.3 HD-Zip转录因子与花青苷的研究第21-22页
    1.5 研究的目的与意义第22-23页
第二章 材料与方法第23-41页
    2.1 材料第23-24页
        2.1.1 植物材料第23页
        2.1.2 质粒载体和菌株第23页
        2.1.3 主要试剂第23-24页
    2.2 MdHB1及其启动子的克隆与分析第24-25页
    2.3 定量RT-PCR第25页
    2.4 亚细胞定位第25-26页
    2.5 GUS染色确定农杆菌瞬时转化的侵染范围第26-29页
        2.5.1 GUS染色液的配置第26页
        2.5.2 苹果果片GUS染色方法第26-27页
        2.5.3 GUS蛋白定量第27-29页
    2.6 基因瞬时沉默第29-32页
        2.6.1 TRV载体构建第29页
        2.6.2 MdHB1沉默片段筛选第29-32页
        2.6.3 瞬时沉默MdHB1第32页
        2.6.4 瞬时沉默MdHB1和MdMYB10第32页
    2.7 在苹果中瞬时过表达MdHB1第32-33页
    2.8 在烟草中稳定过表达MdHB1第33-35页
    2.9 花青苷含量测定第35页
        2.9.1 高效液相色谱法第35页
        2.9.2 分光光度计法第35页
    2.10 荧光素酶检测第35-37页
        2.10.1 双荧光素酶载体构建第35-36页
        2.10.2 双荧光素酶实验流程第36页
        2.10.3 萤火虫荧光素酶活力图像采集第36-37页
    2.11 GUS实验鉴定启动子转录活性第37页
        2.11.1 GUS载体构建第37页
        2.11.2 烟草叶片GUS染色方法及GUS蛋白定量第37页
    2.12 酵母单杂交实验第37-38页
        2.12.1 酵母单杂交载体构建第37-38页
        2.12.2 酵母单杂交实验流程第38页
    2.13 酵母双杂交实验第38-39页
        2.13.1 酵母双杂交载体构建第38页
        2.13.2 酵母双杂交实验流程第38-39页
    2.14 双分子荧光互补实验第39-40页
        2.14.1 双分子荧光互补载体构建第39页
        2.14.2 双分子荧光互补实验流程第39-40页
    2.15 数据统计与图像绘制第40-41页
第三章 结果与分析第41-66页
    3.1 MdHB1基因克隆与分析第41-44页
    3.2 MdHB1亚细胞定位第44-45页
    3.3 MdHB1瞬时沉默在白肉苹果‘澳洲青苹’果实中的表型鉴定第45-52页
    3.4 MdHB1瞬时过表达在红肉苹果‘芭蕾’果实中的表型鉴定第52-53页
    3.5 MdHB1过表达的转基因‘NC89’烟草表型观察第53-56页
    3.6 MdHB1和MdMYB10拮抗调控MdDFR和MdUFGT的表达第56-60页
    3.7 MdHB1和MdMYB10共沉默对‘澳洲青苹’果肉着色的影响第60-64页
    3.8 MdHB1与MBW转录因子间的结合第64-66页
第四章 讨论第66-70页
    4.1 MdHB1负调控‘澳洲青苹’果肉中花青苷的合成第66-67页
    4.2 MdMYB10对‘澳洲青苹’果肉着色具有重要意义第67-68页
    4.3 MdHB1负调控花青苷合成的推测机制第68-70页
第五章 结论与创新点第70-72页
    5.1 结论第70-71页
    5.2 创新点第71-72页
参考文献第72-81页
附录第81-101页
    附录1 载体图谱及相应引物第81-92页
    附录2 ‘澳洲青苹’中转录因子及启动子序列第92-98页
    附录3 培养基与试剂第98-99页
    附录4 文中所用缩略词第99-101页
致谢第101-102页
作者简介第102页

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