| 致谢 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1. 综述 | 第13-19页 |
| 1.1 昆虫病原真菌罗伯茨绿僵菌研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 膜蛋白OPY2的研究现状 | 第14-18页 |
| 1.2.1 膜蛋白OPY2的结构 | 第14页 |
| 1.2.2 膜蛋白OPY2的功能 | 第14-17页 |
| 1.2.3 膜蛋白OPY2在丝状真菌中的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2. 材料与方法 | 第19-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-27页 |
| 2.1.1 实验用菌株及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 实验用培养基 | 第19-23页 |
| 2.1.3 实验所用仪器、试剂及试剂盒 | 第23-26页 |
| 2.1.4 实验所用引物 | 第26-27页 |
| 2.1.5 菌株的保存 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-46页 |
| 2.2.1 基因敲除、回补载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.2 细菌转化 | 第29-31页 |
| 2.2.3 真菌分生孢子孢子悬液的制备 | 第31页 |
| 2.2.4 根癌农杆菌介导的罗伯茨绿僵菌遗传转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 罗伯茨绿僵菌不同条件下菌丝样品的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.6 不同胁迫条件下绿僵菌突变体和野生型的生长耐受情况比较 | 第33页 |
| 2.2.7 不同胁迫条件下绿僵菌突变体和野生型萌发情况比较 | 第33页 |
| 2.2.8 疏水平皿和昆虫体壁诱导附着孢形成 | 第33-34页 |
| 2.2.9 罗伯茨绿僵菌生物测定 | 第34页 |
| 2.2.10 真菌基因组DNA的抽提 | 第34-35页 |
| 2.2.11 真菌总RNA的提取以及DNA的去除 | 第35-36页 |
| 2.2.12 cDNA的反转录合成 | 第36页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR(q-RT-PCR) | 第36-37页 |
| 2.2.14 RLM-RT-PCR | 第37-38页 |
| 2.2.15 真菌总蛋白的抽提 | 第38-39页 |
| 2.2.16 真菌膜蛋白的抽提 | 第39-40页 |
| 2.2.17 Western Blot检测 | 第40-41页 |
| 2.2.18 免疫荧光染色实验 | 第41-42页 |
| 2.2.19 酵母双杂交检测 | 第42-44页 |
| 2.2.20 用RNA-Seq进行转录组学分析 | 第44-46页 |
| 3. 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.1 罗伯茨绿僵菌膜蛋白Mr-OPY2 | 第46页 |
| 3.2 Mr-OPY2和Mr-Ste50的敲除及表型分析 | 第46-48页 |
| 3.3 ΔMr-OPY2和ΔMr-Ste50的抗逆性分析 | 第48-51页 |
| 3.4 Mr-OPY2和Mr-Ste50的与附着胞形成 | 第51页 |
| 3.5 Mr-OPY2和Mr-Ste50与杀虫毒力 | 第51-53页 |
| 3.6 膜蛋白Mr-OPY2的转录调控 | 第53-54页 |
| 3.7 膜蛋白Mr-OPY2的翻译调控 | 第54-56页 |
| 3.8 上游uORF抑制了MrOPY2-L的翻译 | 第56-59页 |
| 3.9 Mr-OPY2和Mr-Ste50调控Hog1-MAPK和Fus3-MAPK的磷酸化水平 | 第59-60页 |
| 3.10 Mr-Ste50作为接头蛋白在空间上连接Mr-OPY2与MAPKKK | 第60-61页 |
| 3.11 RNA-Seq分析 | 第61-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
