| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第12-17页 |
| 1.1 支原体概述 | 第12-13页 |
| 1.2 滑液支原体研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 病原学研究 | 第13页 |
| 1.2.2 流行病学研究 | 第13-14页 |
| 1.2.3 致病机理 | 第14-15页 |
| 1.2.4 临床症状及病理变化 | 第15页 |
| 1.2.5 诊断方法研究 | 第15-16页 |
| 1.2.6 滑液支原体病防治研究 | 第16-17页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第17页 |
| 2. 材料和方法 | 第17-28页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 病料来源 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株及来源 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂与药品 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂旳配制 | 第18-19页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 分离培养及形态观察 | 第19-20页 |
| 2.2.2 L型细菌鉴定 | 第20页 |
| 2.2.3 血清凝集试验 | 第20页 |
| 2.2.4 鸡胚感染试验 | 第20页 |
| 2.2.5 PCR扩增及序列分析 | 第20-24页 |
| 2.2.5.1 基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.5.2 支原体通用设计 | 第21页 |
| 2.2.5.3 PCR扩增 | 第21页 |
| 2.2.5.4 PCR产物回收 | 第21-22页 |
| 2.2.5.5 连接 | 第22页 |
| 2.2.5.6 连接产物热激转化DH5α | 第22页 |
| 2.2.5.7 质粒抽提及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.5.8 MS分离株与MS WVU1853标准株的鉴别 | 第23-24页 |
| 2.2.6 MS分离株攻毒模型的建立 | 第24-25页 |
| 2.2.6.1 滑液支原体MS JS1生长曲线的测定 | 第24页 |
| 2.2.6.2 SPF鸡攻毒试验 | 第24页 |
| 2.2.6.3 剖检病变观察 | 第24-25页 |
| 2.2.6.4 分菌情况 | 第25页 |
| 2.2.7 针对MS、MG、EC和SA的多重PCR检测方法的建立 | 第25-28页 |
| 2.2.7.1 多重PCR引物的设计 | 第25-26页 |
| 2.2.7.2 基因组DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.7.3 多重PCR引物组合筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.7.4 正交法确定最佳多重PCR体系 | 第27-28页 |
| 2.2.7.5 退火温度对扩增效果的影响 | 第28页 |
| 2.2.7.6 多重PCR反应的特异性实验 | 第28页 |
| 2.2.7.7 多重PCR敏感性实验 | 第28页 |
| 2.2.7.8 临床感染组织样本检测 | 第28页 |
| 3. 结果 | 第28-37页 |
| 3.1 分离培养 | 第28-29页 |
| 3.2 L型细菌鉴定 | 第29页 |
| 3.3 平板凝集试验 | 第29页 |
| 3.4 鸡胚感染试验 | 第29-30页 |
| 3.5 分离株PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 3.5.1 支原体 16S r RNA测序鉴定 | 第30页 |
| 3.5.2 MS分离株与MS WVU1853标准株的鉴别结果 | 第30-31页 |
| 3.6 分离株攻毒模型的建立 | 第31-34页 |
| 3.6.1 分离株滑液支原体MS JS1生长曲线的测定 | 第31-32页 |
| 3.6.2 SPF鸡攻毒实验 | 第32-33页 |
| 3.6.3 剖检结果 | 第33页 |
| 3.6.4 分菌结果 | 第33-34页 |
| 3.7 多重PCR检测方法的建立 | 第34-37页 |
| 3.7.1 多重PCR引物组合筛选 | 第34-35页 |
| 3.7.2 正交法确定最佳多重PCR体系 | 第35页 |
| 3.7.3 多重PCR退火温度的优化 | 第35-36页 |
| 3.7.4 多重PCR反应的特异性检测 | 第36页 |
| 3.7.5 多重PCR敏感性检测 | 第36-37页 |
| 3.7.6 用多重PCR检测临床样本 | 第37页 |
| 4.讨论 | 第37-39页 |
| 4.1 滑液支原体的培养 | 第38页 |
| 4.2 滑液支原体对SPF鸡人工感染 | 第38页 |
| 4.3 多重PCR的建立 | 第38-39页 |
| 5.结论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
