| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩略词 | 第13-20页 |
| 前言 | 第20-36页 |
| 1. 病毒感染与天然免疫 | 第20-26页 |
| 1.1 天然免疫概述 | 第20页 |
| 1.2 TLRs及其信号转导通路 | 第20-22页 |
| 1.3 RLRs及其信号转导通路 | 第22-23页 |
| 1.4 NLRs及其信号转导通路 | 第23-24页 |
| 1.5 病毒逃避天然免疫的机制研究进展 | 第24-26页 |
| 2. 病毒感染与细胞自噬 | 第26-32页 |
| 2.1 自噬概述 | 第26-29页 |
| 2.2 自噬的研究方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 观察自噬体的形成 | 第29-30页 |
| 2.2.2 自噬流的监测 | 第30-31页 |
| 2.3 病毒感染与自噬 | 第31-32页 |
| 2.3.1 病毒感染抑制细胞自噬,促进自身复制 | 第31-32页 |
| 2.3.2 病毒感染诱导细胞自噬,促进自身复制 | 第32页 |
| 3. 自噬与天然免疫 | 第32-33页 |
| 4、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV) | 第33-34页 |
| 4.1 MERS-CoV概述 | 第33-34页 |
| 4.2 MERS-CoV与天然免疫 | 第34页 |
| 5、研究目的及意义 | 第34-36页 |
| 材料方法 | 第36-45页 |
| 1. 材料 | 第36-38页 |
| 1.1 质粒 | 第36页 |
| 1.2 细胞系及病毒毒株 | 第36页 |
| 1.3 抗体 | 第36-37页 |
| 1.4 主要试剂 | 第37页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 1.6 常用溶液 | 第38页 |
| 2. 方法 | 第38-45页 |
| 2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2 表达质粒构建 | 第38-41页 |
| 2.3 SDS-PAGE以及Western-blot鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4 免疫荧光和激光共聚焦实验 | 第42-43页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第43页 |
| 2.6 半定量RT-PCR(reverse transcription-PCR) | 第43-44页 |
| 2.7 免疫共沉淀 | 第44-45页 |
| 结果 | 第45-76页 |
| 第一部分 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白的表达和亚细胞定位 | 第45-50页 |
| 1.1 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白表达质粒的构建与表达验证 | 第45页 |
| 1.2 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白的亚细胞定位 | 第45-47页 |
| 1.3 讨论 | 第47-49页 |
| 1.4 小结 | 第49-50页 |
| 第二部分 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白拮抗干扰素功能的筛选及机制研究 | 第50-68页 |
| 2.1 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白拮抗干扰素功能的筛选 | 第50-55页 |
| 2.1.1 ORF4a,ORF4b,ORF5,以及M蛋白具有拮抗Ⅰ型干扰素的功能 | 第50-51页 |
| 2.1.2 ORF4a,ORF4b,ORF5以及M蛋白能抑制IRF-3的功能,同时ORF4a还能抑制NF-κB的激活 | 第51-52页 |
| 2.1.3 ORF4a,ORF 4b以及M蛋白能够抑制干扰素信号转导 | 第52-53页 |
| 2.1.4 讨论 | 第53-54页 |
| 2.1.5 小结 | 第54-55页 |
| 2.2 ORF4b抑制Ⅰ型干扰素的机制研究 | 第55-68页 |
| 2.2.1 ORF 4b为核定位蛋白,能够抑制Ⅰ型干扰素反应 | 第55-56页 |
| 2.2.2 ORF 4b与MDA5、IKKε、TBK1相互作用 | 第56-58页 |
| 2.2.3 ORF4b能够抑制过表达RIG-I,MDA5,MAVS,IKKε,TBK-1以及IRF-3诱导的Ⅰ型干扰素反应 | 第58-59页 |
| 2.2.4 缺失核定位信号后ORF4b不能够抑制IRF3诱导的Ⅰ型干扰素反应 | 第59-60页 |
| 2.2.5 ORF4b不影响MDA5与MAVS的结合 | 第60-61页 |
| 2.2.6 ORF4b能够抑制IKKε/TBK1诱导的IRF3磷酸化和入核 | 第61-62页 |
| 2.2.7 ORF4b不影响IKK-TBK1与其磷酸化底物IRF3/IRF7的结合 | 第62-63页 |
| 2.2.8 ORF4b能够抑制IKK8与MAVS的结合 | 第63-64页 |
| 2.2.9 讨论 | 第64-67页 |
| 2.2.10 小结 | 第67-68页 |
| 第三部分 MERS-CoV结构蛋白和附属蛋白诱导细胞自噬的功能研究 | 第68-76页 |
| 3.1 MERS-CoV结构蛋白E和M能够诱导自噬体的聚集 | 第68-69页 |
| 3.2 MERS-CoV结构蛋白E和M能够诱导不完全自噬 | 第69-71页 |
| 3.2.1 E蛋白和M蛋白对自噬性底物p62表达水平无明显影响 | 第69-70页 |
| 3.2.2 LC3 turnover实验 | 第70页 |
| 3.2.3 mRFP-GFP-LC3呈递实验和GFP-LC3与LAMPl共定位实验 | 第70-71页 |
| 3.3 MERS-CoV结构蛋白E和M能够激活IRE1-XBP1通路 | 第71-72页 |
| 3.4 MERS-CoV结构蛋白E和M诱导的自噬不依赖mTOR/4E-BP1和mTOR/S6K通路 | 第72-73页 |
| 3.5 讨论 | 第73-75页 |
| 3.6 小结 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 发表综述 | 第91-103页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 个人简历 | 第104页 |
