| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 主要中英文对照表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 Toll样受体概况 | 第12-22页 |
| ·鸡的Toll样受体 | 第13-19页 |
| ·禽类TLR1和TLR2亚家族及其作用模式 | 第14-15页 |
| ·禽类独特的TLR15及其效应 | 第15-16页 |
| ·脊椎动物保守的TLRs在禽类的分子进化及作用机制 | 第16-18页 |
| ·Toll样受体的应用前景 | 第18-19页 |
| ·脊椎动物TLR2亚家族结构与功能 | 第19-21页 |
| ·TLR2亚家族结构特点 | 第19-20页 |
| ·TLR2亚家族功能特点 | 第20-21页 |
| ·开展本课题研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 鸡Toll样受体1/2基因的克隆 | 第22-28页 |
| ·材料和方法 | 第22-25页 |
| ·材料处理 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·PBMC的核酸提取 | 第22页 |
| ·反转录合成cDNA | 第22页 |
| ·引物设计和目的基因片段的扩增 | 第22-25页 |
| ·结果 | 第25-26页 |
| ·ChTLR1LA基因的PCR扩增结果 | 第25页 |
| ·ChTLR1LB基因的PCR扩增结果 | 第25-26页 |
| ·ChTLR2t1基因的PCR扩增结果 | 第26页 |
| ·ChTLR2t2基因的PCR扩增结果 | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章:鸡Toll样受体1/2重组质粒的构建 | 第28-37页 |
| ·材料和方法 | 第28-29页 |
| ·菌株及载体 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·鉴定引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| ·pVITRO1-neo-mes载体的酶切 | 第29页 |
| ·DH5α E.coli感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·插入的目的片段的双酶切 | 第30页 |
| ·重组质粒的连接、转化与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒稳定转染前的准备 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·重组质粒pVITRO1-neo-mes-chLR1LA的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pVITRO1-neo-mcs-chTLR1LB的PCR鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒pVITRO1-neo-mcs-chTLR2t1的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pVITRO1-neo-mcs-chTLR2t2的PCR鉴定 | 第34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第四章:鸡Toll样受体1/2重组质粒转染Vero细胞 | 第37-47页 |
| ·材料和方法 | 第37-40页 |
| ·细胞及载体 | 第37页 |
| ·主要试剂及配制 | 第37-38页 |
| ·重组真核表达质粒稳定转染Vero细胞 | 第38-39页 |
| ·G418对稳定转染重组质粒evro细胞的筛选 | 第39页 |
| ·转染后Vero细胞株的Toll样受体1/2的mRNA转录水平的检测 | 第39-40页 |
| ·转染后Vero细胞株的Toll样受体1/2表达水平的检测 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·G418抗性筛选结果 | 第40-42页 |
| ·Vero细胞中chTLRs的mRNA转录水平的检测结果 | 第42-44页 |
| ·Vero细胞中重组质粒的蛋白表达的检测 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 鸡的TLR1/2复合物的功能的初步研究 | 第47-52页 |
| ·材料和方法 | 第47-48页 |
| ·细胞、载体及试剂 | 第47页 |
| ·主要试剂配制 | 第47页 |
| ·检测质粒pNiFty2-SEAP的转染T1-T10 Vero细胞株 | 第47页 |
| ·LPS、Zymosan刺激T1’-T10’Vero细胞株浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·HEK-Blue~(TM) Detection检测重组细胞表达的分泌型碱性磷酸酶活性 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·G418和博来霉素Zeocin对重组细胞的筛选 | 第48-49页 |
| ·HEK-Blue~(TM) Detection检测结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 个人简历 | 第59页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文及参与科研项目 | 第59页 |
