| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-37页 |
| 1.1 玉米简介及重要性 | 第13-14页 |
| 1.2 VPPs蛋白家族及研究进展 | 第14-22页 |
| 1.3 细胞凋亡与植物发育 | 第22-24页 |
| 1.4 玉米opaque突变及相关研究进展 | 第24-30页 |
| 1.5 玉米shrunken突变及相关研究进展 | 第30-36页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 第2章 材料与方法 | 第37-53页 |
| 2.1 试验材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第37-38页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-53页 |
| 2.2.1 未成熟玉米籽粒总蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 抗体制备 | 第39页 |
| 2.2.3 蛋白的表达和纯化 | 第39-41页 |
| 2.2.4 洋葱细胞瞬时转化-基因枪法 | 第41页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的烟草转化[191] | 第41-42页 |
| 2.2.6 植物细胞细胞器分离 | 第42-43页 |
| 2.2.7 Zm VPP5互作蛋白筛选及回转验证 | 第43-44页 |
| 2.2.8 互作验证-LCI assay | 第44-45页 |
| 2.2.9 酵母细胞的盐敏感实验 | 第45页 |
| 2.2.10 转基因玉米OxVPP5的水培 | 第45页 |
| 2.2.11 定量PCR分析 | 第45-46页 |
| 2.2.12 TCA循环相关代谢物的质谱分析[145] | 第46页 |
| 2.2.13 石蜡切片的制备和观察 | 第46-47页 |
| 2.2.14 半薄切片制备及观察 | 第47-48页 |
| 2.2.15 透射电镜切片制备和观察 | 第48-49页 |
| 2.2.16 扫描电镜样品制备和观察 | 第49页 |
| 2.2.17 活细胞染色[157] | 第49页 |
| 2.2.18 生化成分分析 | 第49-53页 |
| 第3章 Zm VPP5的克隆和功能研究 | 第53-70页 |
| 3.1、引言 | 第53页 |
| 3.2、结果与分析 | 第53-65页 |
| 3.2.1 ZmVPP5是一个截短形式的VPPs蛋白家族成员 | 第53-55页 |
| 3.2.2 类ZmVPP5截短形式VPPs成员没有形成单独的进化分支 | 第55-56页 |
| 3.2.3 玉米ZmVPP5在植株各组织中普遍表达 | 第56-58页 |
| 3.2.4 ZmVPP5在质膜、液泡膜和细胞核上均有定位 | 第58-59页 |
| 3.2.5 异源表达Zm VPP5降低酵母的高盐耐受性 | 第59-60页 |
| 3.2.6 过表达ZmVPP5的玉米植株对高盐更加敏感 | 第60-62页 |
| 3.2.7 酵母双杂交分析表明Zmbag6和ZmVPP5可以发生互作 | 第62-64页 |
| 3.2.8 共定位法进行Zm Bag6和Zm VPP5互作验证 | 第64-65页 |
| 3.2.9 荧光素酶半分子蛋白互作验证 | 第65页 |
| 3.3 总结 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-70页 |
| 3.4.1 VPP5和VPP1存在潜在的相互作用关系 | 第66-67页 |
| 3.4.2 ZmVPP5进化来源分析 | 第67-68页 |
| 3.4.3 ZmVPP5互作蛋白筛选 | 第68页 |
| 3.4.4 ZmVPP5的生理功能 | 第68-70页 |
| 第4章 玉米Opaque7的功能研究 | 第70-81页 |
| 4.1 引言 | 第70页 |
| 4.2 结果与分析 | 第70-78页 |
| 4.2.1 Opaque7是一个酰基活化酶 | 第70-71页 |
| 4.2.2 草酸是Opaque7的特异性底物 | 第71-73页 |
| 4.2.3 缺失4个氨基酸不影响Opaque7的酶活 | 第73页 |
| 4.2.4 籽粒中opaque7蛋白含量降低是造成突变表型的本质原因 | 第73-74页 |
| 4.2.5 Opaque7定位在细胞质基质中 | 第74-75页 |
| 4.2.6 Opaque7功能丧失造成氨基酸合成前体含量降低 | 第75-77页 |
| 4.2.7 加入GST-Opaque7能够使无细胞基质中产生小分子代谢物 | 第77-78页 |
| 4.3 总结 | 第78-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-81页 |
| 4.4.1 opaque7突变分子机制研究 | 第79页 |
| 4.4.2 草酸活化后的命运 | 第79-81页 |
| 第5章 玉米Shrunken4基因的功能研究 | 第81-101页 |
| 5.1 引言 | 第81页 |
| 5.2 结果与分析 | 第81-98页 |
| 5.2.1 sh4是一个典型的玉米籽粒发育缺陷突变体 | 第81-82页 |
| 5.2.2 未成熟籽粒胚乳填充不足 | 第82-83页 |
| 5.2.3 Sh4突变造成胚乳细胞发育异常 | 第83-85页 |
| 5.2.4 sh4突变体主要储藏物质积累显著下降 | 第85-87页 |
| 5.2.5 Sh4 突变造成醇溶蛋白转录水平下降 | 第87页 |
| 5.2.6 Sh4 突变造成胚乳细胞大量基因表达变化 | 第87-89页 |
| 5.2.7 Sh4突变造成胚乳细胞凋亡提前 | 第89-90页 |
| 5.2.8 Sh4突变引起胚乳细胞细胞自噬现象 | 第90-92页 |
| 5.2.9 Sh4突变显著抑制对蛋白翻译 | 第92-94页 |
| 5.2.10 凋亡对糖类代谢的影响 | 第94-98页 |
| 5.2.11 sh4基因的图位克隆 | 第98页 |
| 5.3 总结 | 第98-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-101页 |
| 5.4.1 Sh4蛋白突变造成籽粒物质合成降低 | 第100页 |
| 5.4.2 Sh4突变造成细胞严重的凋亡表型 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-113页 |
| 作者在攻读博士学位期间公开发表的论文 | 第113页 |
| 作者在攻读博士学位期间公开发表的专利 | 第113-114页 |
| 作者在攻读博士学位期间所作的项目 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
