| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-22页 |
| ·PCL 的结构、性能及应用 | 第11页 |
| ·PCL 降解微生物及其降解酶 | 第11-17页 |
| ·PCL 降解菌 | 第12-13页 |
| ·PCL 降解酶 | 第13-17页 |
| ·PCL 解聚酶的分子生物学研究 | 第17-19页 |
| ·PCL 生物降解机制的研究 | 第19页 |
| ·PCL 降解的影响因素 | 第19-20页 |
| ·微生物与降解酶对 PCL 降解的影响 | 第19-20页 |
| ·PCL 自身性能对降解的影响 | 第20页 |
| ·本论文立题依据 | 第20-22页 |
| 第二章 PCL 降解菌 DS1001 产酶条件的优化 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验菌株 | 第22页 |
| ·实验药品 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·PCL 解聚酶粗酶液的制备 | 第23页 |
| ·PCL 解聚酶活力测定方法 | 第23页 |
| ·菌株 DS1001 产酶条件的优化 | 第23-24页 |
| ·结果与讨论 | 第24-33页 |
| ·菌株 PCL 降解能力的验证 | 第24页 |
| ·发酵时间对菌株产酶的影响 | 第24-25页 |
| ·培养基初始 pH 对菌株产酶的影响 | 第25-26页 |
| ·培养温度对菌株产酶的影响 | 第26页 |
| ·不同含碳量对菌株产酶的影响 | 第26-27页 |
| ·不同装液量对菌株产酶的影响 | 第27-28页 |
| ·Box-Behnken 组合设计法优化菌株产酶条件 | 第28-32页 |
| ·菌株产 PCL 解聚酶最佳条件的验证 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 PCL 解聚酶的分离纯化及性质研究 | 第34-53页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·实验菌株 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·实验药品 | 第34页 |
| ·常用试剂配制 | 第34-35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·PCL 解聚酶的分离纯化 | 第35-36页 |
| ·酶活性检测方法 | 第36页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| ·TCA 沉淀 | 第37页 |
| ·PCL 解聚酶纯度及分子量的测定 | 第37-38页 |
| ·PCL 解聚酶最适反应温度与热稳定性的测定 | 第38页 |
| ·PCL 解聚酶最适反应 pH 与 pH 稳定性的测定 | 第38页 |
| ·金属离子、酶抑制剂及有机溶剂对 PCL 解聚酶活力的影响 | 第38页 |
| ·PCL 解聚酶酶学属性的研究 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-52页 |
| ·PCL 解聚酶的纯化 | 第39-42页 |
| ·PCL 解聚酶酶学性质的研究 | 第42-47页 |
| ·PCL 解聚酶酶学属性的研究 | 第47-51页 |
| ·PCL 解聚酶降解产物的测定 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 PCL 解聚酶基因的克隆与表达 | 第53-72页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验菌株、质粒与载体 | 第53页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第53-54页 |
| ·实验试剂 | 第54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·质谱 MALDI-TOF-PMF 鉴定 | 第54-55页 |
| ·菌株 DS1001 全基因组 DNA 的提取 | 第55页 |
| ·基因的克隆与纯化 | 第55页 |
| ·基因片段与载体的连接 | 第55页 |
| ·连接产物的转化及重组质粒的筛选 | 第55-56页 |
| ·蛋白异源表达宿主菌的构建 | 第56页 |
| ·Pclase 突变体的克隆 | 第56-57页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第57页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第57-58页 |
| ·目的蛋白序列分析及结构预测 | 第58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-70页 |
| ·PCL 解聚酶 MALDI-TOF-PMF 鉴定 | 第58-60页 |
| ·pclase 的克隆 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的构建 | 第61页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第61-62页 |
| ·pclase 的异源表达 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白 Pclase 表达位置的检测 | 第63页 |
| ·目的蛋白 Pclase 的分离纯化 | 第63-64页 |
| ·Pclase 结构与功能的研究 | 第64-68页 |
| ·Pclase 突变体的构建 | 第68-69页 |
| ·Pclase 突变体的基因表达分析 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 第五章 PCL 降解机制的探讨 | 第72-77页 |
| ·实验材料 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-75页 |
| ·菌株 DS1001 对 PCL 膜的降解 | 第73-74页 |
| ·PCL 降解机制的探讨 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
