| 致谢 | 第1-9页 |
| 中文内容摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 背景 | 第11-17页 |
| ·Gab2基因和Gab2蛋白概述 | 第11-13页 |
| ·Gab2基因及其表达蛋白综述 | 第11页 |
| ·Gab2介导的信号转导机制 | 第11-12页 |
| ·Gab2与乳腺癌的关系 | 第12-13页 |
| ·Gab2与结肠癌的关系 | 第13页 |
| ·基因组成概述 | 第13-15页 |
| ·3'UTR片段的位置 | 第13页 |
| ·3'UTR片段与microRNA的关系 | 第13-14页 |
| ·Coding Sequence(CDS)区域概述 | 第14-15页 |
| ·Mutation对基因表达的影响 | 第15页 |
| ·non-coding基因及non-coding功能简介 | 第15-16页 |
| ·MCF-7细胞概述 | 第16页 |
| ·HCT116细胞概述 | 第16-17页 |
| 第二章 实验过与方法 | 第17-39页 |
| ·构建Gab2基因片段表达载体 | 第17-22页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·CDS和full-length(FL)片段的扩增 | 第17-19页 |
| ·mutation(FLM)的构建 | 第19页 |
| ·制备感受态细菌 | 第19-20页 |
| ·CDS,FL以及FLM片段重组质粒的构建 | 第20-22页 |
| ·构建空质粒载体(VEC),CDS,FL和FLM瞬转细胞系 | 第22-26页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的中量抽取 | 第23-24页 |
| ·细胞培养及转染 | 第24-26页 |
| ·瞬转细胞系中基因表达情况的检测 | 第26-30页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·Total RNA的抽取 | 第26-27页 |
| ·miRNA的抽取 | 第27页 |
| ·逆转录 | 第27-28页 |
| ·实时定量荧光PCR(Real-time PCR) | 第28页 |
| ·Western Blot检测细胞内蛋白表达情况 | 第28-30页 |
| ·内源性GAB2基因敲除细胞系的建立 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·细胞培养及转染siRNA | 第30-31页 |
| ·敲除效果测定 | 第31页 |
| ·体外瞬转细胞功能检测 | 第31-35页 |
| ·Soft Agar检测细胞活性 | 第31-32页 |
| ·MTT Assay检测细胞存活能力 | 第32-33页 |
| ·Transwell Assay检测细胞转移侵袭能力 | 第33-35页 |
| ·回补实验检测细胞功能的区别 | 第35-37页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·共转质粒和siRNA | 第35-36页 |
| ·Transwell实验检测回补效果 | 第36页 |
| ·平板克隆形成实验检测回补效果 | 第36-37页 |
| ·RNA-seq检测瞬转细胞系中mRNA的表达变化 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·实验原理 | 第37页 |
| ·实验目的 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37页 |
| ·细胞系中的验证 | 第37-38页 |
| ·临床样品的检测 | 第38-39页 |
| ·临床样品的收集 | 第38页 |
| ·临床样品提取total RNA | 第38页 |
| ·total RNA逆转录cDNA | 第38页 |
| ·实时定量荧光PCR检测 | 第38-39页 |
| 第三章 细胞功能实验结果与讨论 | 第39-53页 |
| ·克隆相关的结果 | 第39-41页 |
| ·pcDNA3.1示意图 | 第39-40页 |
| ·克隆载体构建结果 | 第40-41页 |
| ·实时定量荧光PCR结果 | 第41-42页 |
| ·各细胞系GAB2基因表达情况检测 | 第41页 |
| ·顺转细胞系GAB2基因表达情况检测 | 第41-42页 |
| ·Western Blot测量细胞中Gab2蛋白表达量的结果 | 第42-43页 |
| ·Soft Agar实验结果 | 第43-46页 |
| ·MTT实验结果 | 第46-47页 |
| ·Transwell实验结果 | 第47-49页 |
| ·GAB2基因敲除结果 | 第49-51页 |
| ·Real-time PCR检测敲除效率 | 第49-50页 |
| ·基因敲除后细胞功能实验结果 | 第50-51页 |
| ·回补实验结果 | 第51页 |
| ·细胞功能实验总结 | 第51-53页 |
| 第四章 RNA-seq结果与验证 | 第53-59页 |
| ·RNA-seq检测结果 | 第53-54页 |
| ·RNA-seq变化基因统计 | 第54-55页 |
| ·调控基因在细胞系中的验证 | 第55-56页 |
| ·临床样品验证结果 | 第56-59页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第59-63页 |
| ·过往的认知 | 第59-60页 |
| ·对权威的疑惑 | 第60页 |
| ·编码基因和非编码基因的真正区别 | 第60-62页 |
| ·对未来工作的展望 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
