中文摘要 | 第1-16页 |
Abstract | 第16-23页 |
第一部分 PTPRD下调对乳腺癌细胞增生、凋亡、迁移和侵袭的影响 | 第23-50页 |
(一)前言 | 第23-26页 |
(二)材料和方法 | 第26-37页 |
1. 材料 | 第26-31页 |
·细胞株 | 第26页 |
·主要实验仪器及材料 | 第26-28页 |
·主要实验试剂 | 第28-31页 |
2. 方法 | 第31-37页 |
·细胞培养及传代 | 第31-32页 |
·PTPRDsi RNA瞬转乳腺癌细胞 | 第32-33页 |
·CCK8增殖实验 | 第33页 |
·流式细胞仪检测细胞的凋亡和周期 | 第33-34页 |
·划痕实验 | 第34页 |
·Transwell迁移侵袭实验 | 第34-35页 |
·Western Blot | 第35-37页 |
·统计学处理 | 第37页 |
(三)结果 | 第37-42页 |
1. PTPRD下调可以促进MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭袭 | 第37-39页 |
2. PTPRD siRNA抑制细胞凋亡 | 第39-40页 |
3. PTPRD siRNA对增生、细胞周期的影响 | 第40-41页 |
4. PTPRD siRNA对上皮间质转化的影响 | 第41-42页 |
(四)讨论 | 第42-45页 |
(五)结论 | 第45-46页 |
(六)参考文献 | 第46-50页 |
第二部分 PTPRD与乳腺癌干细胞之间的关系及小鼠成瘤实验 | 第50-78页 |
(一)前言 | 第50-52页 |
(二)材料和方法 | 第52-61页 |
1. 材料 | 第52-53页 |
·细胞系与实验动物 | 第52-53页 |
·主要实验仪器和试剂 | 第53页 |
2. 方法 | 第53-61页 |
·乳腺球培养 | 第53页 |
·RNA抽提 | 第53-54页 |
·SYBRGreen染料法qRT-PCR | 第54-55页 |
·细胞蛋白提取及定量 | 第55页 |
·Western Blot | 第55页 |
·免疫荧光细胞化学 | 第55-56页 |
·克隆形成实验 | 第56页 |
·流式细胞技术检测CD44~+/CD24~-细胞比例 | 第56-57页 |
·磁珠分选CD44~+/CD24~-细胞群 | 第57-58页 |
·裸鼠种植瘤模型的建立 | 第58-59页 |
·组织包埋、切片 | 第59页 |
·HE染色 | 第59-60页 |
·组织蛋白的提取 | 第60页 |
·组织RNA提取 | 第60页 |
·免疫组织化学法 | 第60-61页 |
·统计学处理 | 第61页 |
(三)结果 | 第61-71页 |
1. PTPRD siRNA对CD44~+/CD24~-细胞群比例的影响 | 第61-62页 |
2. PTPRD siRNA对乳腺癌细胞球形成能力的影响 | 第62-63页 |
3. PTPRD siRNA对乳腺癌全克隆形成的影响 | 第63-65页 |
4. PTPRD、STAT3、P-STAT3等在乳腺癌干细胞中的表达 | 第65-66页 |
5. 免疫荧光法检测PTPRD在乳腺癌干细胞及非干细胞群的表达 | 第66-67页 |
6. PTPRD下调对癌干细胞标记分子ALDH1及OCT-4 表达的影响 | 第67-68页 |
7. PTPRDsiRNA对乳腺癌MDA-MB-231 细胞裸鼠种植瘤生长的抑制作用 | 第68-71页 |
(四)讨论 | 第71-74页 |
(五)结论 | 第74-75页 |
(六)参考文献 | 第75-78页 |
第三部分 PTPRD作用的分子机制的探讨 | 第78-91页 |
(一)前言 | 第78-79页 |
(二)材料和方法 | 第79-81页 |
1. 材料 | 第79-80页 |
2. 方法 | 第80-81页 |
·IL-6 作用于细胞 | 第80页 |
·qRT-PCR | 第80页 |
·Western Blot | 第80页 |
·流式细胞仪检测细胞的凋亡 | 第80页 |
·划痕实验 | 第80-81页 |
·CCK-8 实验 | 第81页 |
·统计学处理 | 第81页 |
(三)结果 | 第81-85页 |
1. IL-6 可以促进细胞迁移,抑制凋亡 | 第81-82页 |
2. IL-6 作用过程中PTPRD、P-STAT3,EMT相关蛋白及乳腺癌干细胞标记分子水平的变化 | 第82-84页 |
3. PTPRD si RNA对STAT3表达和活化的影响 | 第84-85页 |
(四)讨论 | 第85-88页 |
(五)结论 | 第88-89页 |
(六)参考文献 | 第89-91页 |
第四部分 PTPRD、P-STAT3在乳腺癌组织中的表达与临床病理特点和预后的关系 | 第91-105页 |
(一)前言 | 第91-92页 |
(二)材料和方法 | 第92-94页 |
1. 材料 | 第92页 |
2. 方法 | 第92-94页 |
·乳腺癌组织收集、临床病理参数收集及组织芯片的制作 | 第92页 |
·免疫组织化学法 | 第92-93页 |
·免疫组织化学结果判定 | 第93页 |
·临床病理资料收集及预后随访 | 第93页 |
·统计学处理 | 第93-94页 |
(三)结果 | 第94-100页 |
1. PTPRD、P-STAT3在乳腺癌及乳腺组织中的表达 | 第94-95页 |
2. PTPRD、P-STAT3的表达与临床病理参数之间的关系 | 第95-97页 |
3. PTPRD、P-STAT3的表达与预后之间的关系 | 第97-100页 |
(四)讨论 | 第100-102页 |
(五)结论 | 第102-103页 |
(六)参考文献 | 第103-105页 |
综述 | 第105-119页 |
参考文献 | 第114-119页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第119-120页 |
致谢 | 第120-121页 |