| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一部分 综述 | 第11-18页 |
| 1 猪瘟（CSF）及猪瘟病毒的概述（CSFV） | 第11-15页 |
| ·猪瘟（CSF） | 第11页 |
| ·猪瘟病毒（CSFV） | 第11-15页 |
| 2 猪瘟疫苗的发展 | 第15-16页 |
| 3 流感的现状 | 第16-17页 |
| 4 研究目的 | 第17-18页 |
| 第二部分 双价活载体疫苗检测方法的建立 | 第18-33页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·疫苗及细胞系 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-27页 |
| ·检测引物的设计和合成 | 第20页 |
| ·引物灵敏度的鉴定 | 第20-23页 |
| ·PK-15 细胞的培养和接毒 | 第23-24页 |
| ·活疫苗的检测 | 第24-26页 |
| ·活疫苗的稳定性检测 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| ·第一组引物灵敏度鉴定 | 第27-28页 |
| ·第二组引物灵敏度鉴定 | 第28-29页 |
| ·1-5 代细胞接毒的检测 | 第29-31页 |
| ·活疫苗在细胞中的稳定传代 | 第31-33页 |
| 第三部分 H1N1 甲型流感-猪瘟病毒双价活载体疫苗的反向遗传学改造 | 第33-65页 |
| 1 材料 | 第35-39页 |
| ·载体,菌种和细胞系 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·溶液配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-39页 |
| 2 方法 | 第39-54页 |
| ·HA1-2A 片段的连接 | 第39-40页 |
| ·T7-5’UTR 基因片段的截取 | 第40-41页 |
| ·T7-5’UTR-HA1-2A 片段的连接 | 第41-44页 |
| ·2A- NPRO 基因的扩增 | 第44-46页 |
| ·T7-5’UTR-HA1-2A-NPRO 基因的连接 | 第46-48页 |
| ·PMD18-T-T7-5’UTR-HA1-2A-NPRO 质粒中 Cla 酶切位点的突变 | 第48-51页 |
| ·酶切连接构建新的重组质粒 PMC18-T-HA-C | 第51-54页 |
| 3 结果 | 第54-65页 |
| ·HA-2A 片段的扩增和鉴定 | 第54页 |
| ·T7-5’UTR 片段的扩增和鉴定 | 第54-55页 |
| ·PMD18-T-T7-5’UTR-HA1-2A 质粒的构建和鉴定 | 第55-56页 |
| ·PMD18-T-2A-NPRO 质粒的构建和鉴定 | 第56-57页 |
| ·PMD18-T-T7-5’UTR-HA1-2A-NPRO 质粒的构建和鉴定 | 第57-59页 |
| ·PMD18-T-T7-5’UTR-HA1-2A-NPRO 质粒中 Cla 酶切位点的突变 | 第59-62页 |
| ·酶切连接构建新的重组质粒 PMC18-T-HA-C | 第62-65页 |
| 第四部分 甲型流感-猪瘟病毒双价活载体疫苗的拯救 | 第65-71页 |
| 1 材料 | 第65-67页 |
| ·载体，菌种和细胞系 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65-66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| ·pEGFP-N3-T7RNAP 转染效率的鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第68页 |
| ·重组病毒的检测 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-71页 |
| ·pEGFP-N3-T7RNAP 转染效率的鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组病毒的检测 | 第70-71页 |
| 第五部分 结果与讨论 | 第71-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
