| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 1 实验一蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建 | 第14-33页 |
| ·实验材料与试剂 | 第14-16页 |
| ·虫株与质粒 | 第14-15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·实验仪器 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-26页 |
| ·蓝氏贾第鞭毛虫基因组 DNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·pGL gdh-Neo重组质粒构建 | 第17-22页 |
| ·贾第虫快速标记载体pGL MCS - 3HA -gah- Neo 的构建 | 第22-23页 |
| ·应用重组载体pGL MCS - 3HA -gdh- Neo 标记贾第虫 H2A 基因 | 第23-24页 |
| ·H 2A 重组质粒电穿孔转染及 G418 筛选 | 第24-25页 |
| ·H2A 贾第虫重组株基因组 PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·H2A 贾第虫重组株蛋白质印迹分析 | 第25页 |
| ·H2A 贾第虫重组株免疫荧光分析 | 第25-26页 |
| ·实验结果与分析 | 第26-32页 |
| ·蓝氏贾第鞭毛虫基因组总 DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·gdh 基因侧翼序列和 Neo 基因编码序列的 PC R 扩增 | 第27-28页 |
| ·片段 gdh 5' UT R- N eo -gdh 3 ' U T R 的扩增 | 第28页 |
| ·pGL gdh- Neo 重组质粒 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·GlH2A 基因的扩增 | 第29页 |
| ·GlH2A 的标记载体pGL H2A -3HA- gdh -Neo 构建 | 第29-30页 |
| ·H2A 贾第虫重组株基因组 PC R 分析 | 第30页 |
| ·H2A 贾第虫重组株蛋白质印迹分析 | 第30-31页 |
| ·H2A 贾第虫重组株免疫荧光分析 | 第31-32页 |
| ·实验讨论 | 第32-33页 |
| 2 实验二蓝氏贾第鞭毛虫稳定表达载体的构建 | 第33-44页 |
| ·实验材料和质粒 | 第33-34页 |
| ·质粒 | 第33-34页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器及设备 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·pGL tim-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第34-36页 |
| ·pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第36-37页 |
| ·pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第37-38页 |
| ·pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo 重组质粒电穿孔转染及 G418 筛选 | 第38-39页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第39页 |
| ·实验结果与分析 | 第39-42页 |
| ·tim 基因的 PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·pGL tim-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第40页 |
| ·pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第40-41页 |
| ·Luc 的 PCR 扩增 | 第41页 |
| ·pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo 重组质粒构建 | 第41-42页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第42页 |
| ·实验讨论 | 第42-44页 |
| 3 实验三 蓝氏贾第鞭毛虫带有 SN A P/ CLIP 融合蛋白标签的表达载体构建 | 第44-50页 |
| ·实验材料和质粒 | 第44-45页 |
| ·质粒 | 第44-45页 |
| ·实验试剂 | 第45页 |
| ·实验仪器及设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·SNAP/CLIP 的 PC R 扩增 | 第45-46页 |
| ·SNAP/CLIP 标签重组质粒构建 | 第46-47页 |
| ·菌种冻存 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-49页 |
| ·SNAP/CLIP 的 PCR 扩增 | 第47页 |
| ·PCR法鉴定pGL tim-Tub- SNAP/CLIP- gdh- Neo 重组质粒 | 第47-48页 |
| ·双酶切法鉴定pGLtim -Tub- SNAP/ CLIP- gdh - Neo 重组质粒 | 第48-49页 |
| ·实验讨论 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 论文综述 | 第52-59页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 附录A 缩写词 | 第59-60页 |
| 附录B 主要溶液的配制 | 第60-65页 |
| 附录C 相关载体说明 | 第65-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
