摘要 | 第1-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
缩略语中英文对照 | 第14-16页 |
第一篇 文献综述 | 第16-36页 |
第一章 转生长激素基因动物研究综述 | 第16-28页 |
1 生长激素概述 | 第16-20页 |
·生长激素的生物学研究 | 第16-19页 |
·生长激素在动物生产上所具有的经济价值 | 第19-20页 |
2 转生长激素基因动物 | 第20-23页 |
·生产转GH基因动物的必要性 | 第21页 |
·转GH基因动物种类 | 第21-22页 |
·生产转GH基因动物出现的问题 | 第22-23页 |
3 总结 | 第23页 |
参考文献 | 第23-28页 |
第二章 四环素调控表达系统研究综述 | 第28-36页 |
1 哺乳动物基因诱导表达系统简介 | 第28页 |
2 四环素调控系统 | 第28-32页 |
·TetO诱导表达系统的建立 | 第28-29页 |
·Tet-On/Tet-Off作用机制比较 | 第29-30页 |
·TetO诱导表达系统的优点 | 第30-31页 |
·常用TetO诱导表达系统的载体 | 第31-32页 |
·TetO诱导表达系统的应用 | 第32页 |
3 研究目的与意义 | 第32-33页 |
参考文献 | 第33-36页 |
第二篇 试验部分 | 第36-116页 |
第一章 利用显微注射线性DNA片段的方法生产转Tet-On诱导的pGH基因猪研究 | 第36-64页 |
1 材料方法 | 第36-50页 |
·试验材料 | 第36-38页 |
·试验方法 | 第38-50页 |
2 结果 | 第50-60页 |
·pGH基因rtTA Advanceed基因和扩增及测序 | 第50页 |
·pGH基因信号肽分析 | 第50-51页 |
·诱导表达载体鉴定 | 第51-52页 |
·大白猪PEF系的建立 | 第52页 |
·目的基因表达分析 | 第52-54页 |
·注射用DNA | 第54-55页 |
·转基因后代的鉴定 | 第55-60页 |
3 讨论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-64页 |
第二章 稳定表达转诱导型pGH基因细胞系的建立 | 第64-86页 |
1 材料方法 | 第64-70页 |
·材料 | 第64-66页 |
·实验方法 | 第66-70页 |
2 试验结果 | 第70-82页 |
·梅山猪胎儿成纤维细胞系 | 第70-71页 |
·慢病毒对细胞系的筛选 | 第71-76页 |
·睡美人系统筛选诱导表达细胞系 | 第76-82页 |
3 讨论 | 第82-84页 |
参考文献 | 第84-86页 |
第三章 肝脏强效特异表达启动子的构建 | 第86-104页 |
1 材料方法 | 第87-93页 |
·材料 | 第87页 |
·方法 | 第87-93页 |
2 试验结果 | 第93-100页 |
·猪白蛋白核心启动子生物信息学分析 | 第93-95页 |
·启动子荧光素酶检测载体的鉴定 | 第95-97页 |
·荧光素酶活性分析 | 第97-100页 |
3 讨论 | 第100-102页 |
参考文献 | 第102-104页 |
第四章 GHR、IGFⅠR和IGFⅡR基因表达规律研究 | 第104-116页 |
1 材料方法 | 第104-106页 |
·材料 | 第104页 |
·方法 | 第104-106页 |
2 试验结果 | 第106-111页 |
·GHR时空表达模式 | 第106-107页 |
·IGFⅠR时空表达模式 | 第107-109页 |
·IGFⅡR时空表达模式 | 第109-111页 |
3 讨论 | 第111-113页 |
参考文献 | 第113-116页 |
附录 | 第116-131页 |
附录一 主要溶液的配制 | 第116-118页 |
附录二 显微注射DNA片段(TRE-Tight-BI-GH-rtTA-Advanced)序列 | 第118-119页 |
附录三 G0代转基因猪与非转基因猪后代的PCR鉴定 | 第119-123页 |
附录四 白蛋白启动子转录因子结合位点分析 | 第123-127页 |
附录五 GHR、IGFⅠR、IGⅡR和GAPDH定量引物标准曲线 | 第127-131页 |
全文结论 | 第131-132页 |
创新之处 | 第132-134页 |
需要进一步研究的内容 | 第134-135页 |
攻读博士期间发表的论文 | 第135-136页 |
致谢 | 第136页 |