| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-33页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·试剂与培养基 | 第18页 |
| ·质粒与菌株 | 第18页 |
| ·抗体及 ELISA 检测试剂盒 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第19-20页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-33页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第20-23页 |
| ·真核表达载体的转染与稳转细胞系的建立 | 第23页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第23-25页 |
| ·重组蛋白中内毒素的去除 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE 及 Westren blot | 第26页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第26-27页 |
| ·小鼠血清中 CRT 的检测 | 第27页 |
| ·RNA 的提取及反转录 | 第27-28页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第28页 |
| ·小鼠腹腔巨噬细胞制备方法 | 第28页 |
| ·NO 检测 | 第28-29页 |
| ·细胞因子的检测 | 第29页 |
| ·细胞增殖实验 | 第29页 |
| ·裸鼠肿瘤模型的建立及肿瘤体积计算 | 第29页 |
| ·裸鼠肿瘤组织单细胞悬液的制备 | 第29-30页 |
| ·裸鼠脾细胞悬液的制备 | 第30页 |
| ·裸鼠外周血单个核细胞的制备 | 第30页 |
| ·流式细胞染色 | 第30页 |
| ·免疫组织化学 | 第30-31页 |
| ·克隆形成实验 | 第31页 |
| ·细胞粘附和迁移实验 | 第31-32页 |
| ·统计方法 | 第32-33页 |
| 第三章 表达分泌型 eCRT/39-272 CHO 细胞系的构建与鉴定 | 第33-45页 |
| ·pIRES2-eCRT/39-272 载体的构建 | 第34-36页 |
| ·pIRES2-eCRT/39-272 在 CHO 细胞中的表达 | 第36-38页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 和 CHO-EGFP 稳转细胞系的构建 | 第38-40页 |
| ·pIRES2-eCRT/39-272 和 CHO-EGFP 质粒转染 CHO 细胞系 | 第38页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 和 CHO-EGFP 稳转细胞系的筛选 | 第38-40页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 细胞表面不表达膜型 eCRT/39-272 | 第40-41页 |
| ·eCRT/39-272 及 rCRT/39-272 的纯化及鉴定 | 第41-43页 |
| ·eCRT/39-272 的表达与纯化 | 第41-42页 |
| ·rCRT/39-272 的表达与纯化 | 第42页 |
| ·真核 eCRT/39-272 与原核 rCRT/39-272 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 表达膜结合型 eCRT/39-272 B16 细胞系的构建 | 第45-50页 |
| ·pIRES2-eCRT/39-272-TM 载体的构建 | 第46-47页 |
| ·膜结合型 eCRT/39-272 细胞系的建立与鉴定 | 第47-48页 |
| ·膜结合型 eCRT/39-272 对小鼠腹腔巨噬细胞的刺激作用 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 真核表达 eCRT/39-272 的免疫生物学活性分析 | 第50-59页 |
| ·eCRT/39-272 对小鼠腹腔巨噬细胞的影响 | 第51-52页 |
| ·eCRT/39-272 和 rCRT/39-272 对小鼠腹腔巨噬细胞作用的差异比较 | 第52-54页 |
| ·TLR4 通路对 CRT 激活小鼠腹腔巨噬细胞作用的影响 | 第54-55页 |
| ·LPS 对 eCRT/39-272 激活小鼠腹腔巨噬细胞作用的影响 | 第55-57页 |
| ·eCRT/39-272 糖基化对其激活小鼠腹腔巨噬细胞作用的影响 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第六章 CHO-eCRT/39-272 细胞的体内成瘤特点与机制分析 | 第59-71页 |
| ·分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体内成瘤性的影响 | 第60-62页 |
| ·分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体外增殖的影响 | 第62-65页 |
| ·分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞粘附和迁移的影响 | 第65-67页 |
| ·血清中 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体内成瘤的影响 | 第67-69页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 荷瘤小鼠肿瘤组织局部表达高浓度的可溶性钙网蛋白 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第七章 荷载 CHO-eCRT/39-272 细胞裸鼠的免疫状态分析 | 第71-78页 |
| ·荷瘤小鼠体内免疫细胞比例的分析 | 第72-73页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 肿瘤组织局部 MDSC 细胞比例升高 | 第73-76页 |
| ·CHO-eCRT/39-272 肿瘤组织局部趋化因子 CCL5，MMP-2表达水平升高 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 第八章 讨论 | 第78-89页 |
| ·eCRT/39-272 免疫刺激活性与肿瘤 | 第79-80页 |
| ·CRT 作为血管抑素与肿瘤 | 第80-81页 |
| ·膜结合型 CRT 与肿瘤 | 第81-82页 |
| ·CRT 对免疫系统影响与肿瘤 | 第82-85页 |
| ·裸鼠体系与肿瘤 | 第85页 |
| ·CRT 粘附和迁移能力与肿瘤 | 第85-86页 |
| ·eCRT/39-272 与 rCRT/39-272 免疫刺激活性差异 | 第86-88页 |
| ·总结 | 第88-89页 |
| 文献综述 | 第89-108页 |
| 1 钙网蛋白研究 | 第90-96页 |
| ·CRT 基因与蛋白结构 | 第90-91页 |
| ·CRT 转录水平的调控 | 第91-92页 |
| ·CRT 的细胞定位 | 第92页 |
| ·CRT 的功能研究 | 第92-96页 |
| 2 免疫细胞与肿瘤微环境 | 第96-106页 |
| ·骨髓来源的抑制性细胞 | 第97-101页 |
| ·调节性 T 细胞 | 第101-103页 |
| ·肿瘤相关巨噬细胞 | 第103-105页 |
| ·肿瘤相关树突状细胞 | 第105-106页 |
| 3 细胞因子与肿瘤微环境 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 英文缩略词 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 简历 | 第121-122页 |
