| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 实验材料概况 | 第9-10页 |
| 2 野生稻有利基因概况 | 第10页 |
| ·抗病性 | 第10页 |
| ·抗寒性 | 第10页 |
| ·其他抗性 | 第10页 |
| 3 抗寒基因和抗寒信号通路研究 | 第10-13页 |
| ·抗寒功能基因 | 第11页 |
| ·抗寒信号通路 | 第11-13页 |
| ·依赖ABA的信号通路 | 第11页 |
| ·不依赖ABA的信号通路 | 第11-13页 |
| 4 cDNA文库的构建和筛选 | 第13-18页 |
| ·cDNA文库类型 | 第13-15页 |
| ·普通cDNA文库 | 第14页 |
| ·差减cDNA文库 | 第14页 |
| ·均一化cDNA文库 | 第14页 |
| ·全长cDNA文库 | 第14页 |
| ·全长差减/均一化cDNA文库 | 第14-15页 |
| ·全长cDNA文库类型 | 第15-17页 |
| ·文库筛选方法 | 第17页 |
| ·cDNA末端快速扩增 | 第17页 |
| ·抗体探针筛选cDNA文库 | 第17页 |
| ·PCR法筛选cDNA文库 | 第17页 |
| ·文库大规模测序 | 第17页 |
| ·数据分析方法 | 第17-18页 |
| 5 功能基因DREB(CBF)类转录因子概述 | 第18页 |
| 6 实验目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 cDNA文库的构建 | 第20-34页 |
| 1 实验材料 | 第20页 |
| 2 实验试剂和仪器 | 第20-21页 |
| ·实验试剂 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| 3 实验步骤 | 第21-29页 |
| ·实验材料培育和实验器材预处理 | 第21页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第21-29页 |
| ·实验材料和总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| ·LD-PCR合成cDNA第二链 | 第22-23页 |
| ·cDNA样品的蛋白酶K处理 | 第23-24页 |
| ·SfiⅠ内切酶消化处理ds cDNA | 第24页 |
| ·用CHROMA SPIN-400对cDNA进行分级分离 | 第24-26页 |
| ·ds cDNA连接载体 | 第26页 |
| ·噬菌体包装反应 | 第26-27页 |
| ·原始文库库容测定 | 第27-28页 |
| ·噬菌体文库转化为质粒文库 | 第28页 |
| ·质粒文库的检测 | 第28-29页 |
| 4 实验结果与分析 | 第29-33页 |
| ·总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·ds cDNA合成和SfiⅠ酶消化处理 | 第30页 |
| ·对不同大小的cDNA进行分级分离 | 第30-31页 |
| ·连接噬菌体载体和噬菌体包装 | 第31-32页 |
| ·转化为质粒文库 | 第32页 |
| ·质粒文库检测 | 第32-33页 |
| 5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 功能基因的筛选和表达载体的构建 | 第34-49页 |
| 1 实验材料 | 第34页 |
| 2 实验试剂和仪器 | 第34-35页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| 3 实验步骤 | 第35-38页 |
| ·质粒文库的筛选 | 第35页 |
| ·155号文库克隆表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·目的片段的制备 | 第35-36页 |
| ·载体的制备和连接转化 | 第36-38页 |
| ·CBF基因的克隆和分析 | 第38页 |
| 4 实验结果与分析 | 第38-48页 |
| ·文库筛选和测序结果分析 | 第38-42页 |
| ·155号克隆分析结果 | 第42-44页 |
| ·155号克隆表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·目的片段的制备 | 第44页 |
| ·载体的制备 | 第44-45页 |
| ·连接转化和测序结果 | 第45-46页 |
| ·CBF基因的克隆和分析 | 第46-48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 结论与展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |