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香蕉枯萎病菌4号小种一个致病相关基因克隆及其功能的初步研究

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 前言第10-20页
   ·香蕉枯萎病与香蕉枯萎病菌第10-14页
     ·香蕉枯萎病的发生与危害第10页
     ·尖孢镰孢菌致病机理研究进展第10-14页
   ·香蕉枯萎病抗性研究进展第14-16页
     ·香蕉抗枯萎病机制第14-15页
     ·影响香蕉抗病性的因素第15-16页
   ·香蕉枯萎病菌基因功能研究的相应策略第16-17页
     ·研究香蕉枯萎病菌相关致病基因的研究方法第16页
     ·绿色荧光蛋白在香蕉枯萎病菌相关致病基因研究中的应用第16-17页
   ·选题意义与目标第17-19页
   ·本研究的技术路线第19-20页
2 Focr4-1562致病相关基因的克隆及其生物学表型初步研究.第20-35页
   ·前言第20-21页
   ·试验材料第21-22页
   ·试验方法第22-35页
     ·突变体Focr4-1562致病性验证第22页
     ·香蕉枯萎病菌野生型菌株、插入突变体总DNA的提取第22-23页
     ·Southern blots检测(地高辛标记法)第23-26页
     ·E. coli DH5 α感受态细胞的制备第26页
     ·载体质粒的提取第26-27页
     ·Focr4-1562的T-DNA插入失活基因cDNA全长序列克隆第27-28页
     ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除突变体的构建第28-30页
     ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除转化子的验证第30页
     ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除突变体相关表性分析第30-33页
     ·被敲除mpfol基因的同源重组互补转化子构建第33-35页
     ·被敲除目的基因的同源重组互补转化子检验及纯化第35页
     ·被敲除目的基因的同源重组互补转化子相关表性分析第35页
3 结果与分析第35-53页
   ·T-DNA插入突变体Focr4-1562致病性初步验证结果第35-36页
   ·Southern blots分析结果第36页
   ·插入突变体菌株Focr4-1562的获得及其生物信息学分析与预测第36-39页
     ·mpfol基因的克隆及序列分析第36-38页
     ·mpfol基因的生物信息学分析第38-39页
   ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除载体的构建和筛选第39-40页
     ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除突变体PCR法验证第39页
     ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除转化子Southern blots法验证第39-40页
   ·香蕉枯萎病菌mpfol基因原位互补实验第40-41页
     ·mpfol基因互补载体的构建第40页
     ·互补转化子的筛选、纯化及验证第40-41页
   ·mpfol基因敲除突变体及其互补转化子对潮霉素B敏感性测定第41页
   ·mpfol基因敲除突变体及其互补转化子致病性检测第41-45页
   ·mpfol基因敲除突变体及其互补转化子玻璃纸穿透测定结果第45-46页
   ·mpfol基因敲除突变体及其互补转化子菌落形态观察第46-47页
   ·mpfol基因敲除突变体在不同温度、不同pH中生长测定第47-48页
   ·mpfol基因敲除突变体在不同类碳源中生长测定第48-49页
   ·mpfol基因敲除突变体孢子形态观察及产孢量和分生孢子萌发测定第49-50页
   ·mpfol基因敲除突变体菌丝对细胞壁降解酶敏感性测定第50-51页
   ·mpfol基因敲除突变体菌丝体中纤维素酶、果胶酶含量测定第51-52页
   ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除突变体耐盐情况第52-53页
   ·香蕉枯萎病菌mpfol基因敲除突变体菌丝体产毒素的测定第53页
4 讨论第53-59页
   ·香蕉枯萎病菌mpfol基因的相关信息分析第53-55页
   ·mpfol基因对尖孢镰孢菌的相关表型影响第55页
   ·绿色荧光蛋白基因转化香蕉枯萎病菌第55-56页
   ·PEG介导转化过程中应注意的问题第56-57页
   ·尖孢镰孢菌致病相关的酶及毒素的检测第57-58页
   ·检测尖孢镰孢菌致病性的方法第58-59页
5 问题与展望第59-60页
6 结论第60-61页
参考文献第61-67页
致谢第67页

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