| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·概述萜类化合物 | 第12-15页 |
| ·萜类化合物的概念 | 第12页 |
| ·萜类化合物的分类 | 第12-13页 |
| ·萜类化合物的功能 | 第13-15页 |
| ·萜类化合物的生物合成途径及其关系 | 第15-18页 |
| ·萜类化合物的生物合成途径 | 第15页 |
| ·MVA途径 | 第15-16页 |
| ·MEP途径 | 第16-18页 |
| ·MVA途径和MEP途径的关系 | 第18页 |
| ·萜类化合物生物合成途径中的关键酶 | 第18-24页 |
| ·HMGR | 第19页 |
| ·DXS | 第19-22页 |
| ·DXR | 第22-24页 |
| ·MEP途径的研究意义 | 第24-27页 |
| ·MEP途径是生物生长所必需的 | 第24页 |
| ·MEP途径是潜在的分子药靶 | 第24-25页 |
| ·MEP途径中关键中间体DXP合成的研究 | 第25页 |
| ·本课题研究意义和目的 | 第25-27页 |
| 第二章 重组酶DXS酶的诱导表达及纯化 | 第27-37页 |
| ·材料与仪器 | 第27-30页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·溶液配方 | 第27-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·重组酶DXS的小量诱导表达 | 第30-31页 |
| ·重组酶At-DXS的小量诱导表达 | 第30页 |
| ·重组酶pao-DXS的小量诱导表达 | 第30-31页 |
| ·超声破碎处理菌体沉淀 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE检测诱导表达结果 | 第31页 |
| ·重组酶pao-DXS的大量诱导表达 | 第31-32页 |
| ·超声破碎处理E.coli BL21(DE3)-paodxs的菌体沉淀 | 第32页 |
| ·重组酶pao-DXS的亲和层析纯化及保存 | 第32页 |
| ·重组酶DXS的活性检测 | 第32-33页 |
| ·实验结果与讨论 | 第33-36页 |
| ·重组酶DXS的小量诱导表达 | 第33-34页 |
| ·重组酶pao-DXS的亲和层析纯化结果 | 第34页 |
| ·重组酶pao-DXS的浓度测定结果 | 第34-35页 |
| ·重组酶pao-DXS的活性检测结果 | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 拟南芥dxs基因原核表达载体pET-15b-Atdxs的构建 | 第37-54页 |
| ·材料与仪器 | 第37-39页 |
| ·植株、菌株和载体 | 第37页 |
| ·工具酶及试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液配方 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-50页 |
| ·提取拟南芥总RNA | 第39-40页 |
| ·拟南芥种子进行春化前处理 | 第39页 |
| ·无菌种植 | 第39页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的质量 | 第40页 |
| ·用OligotexTM-dT30mRNA Purification Kit从总RNA中抽提mRNA | 第40-41页 |
| ·mRNA反转录为cDNA | 第41页 |
| ·带酶切位点的Atdxs克隆 | 第41-43页 |
| ·qdxs和hdxs的PCR反应 | 第41-43页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第43页 |
| ·pMD(?)18-T与PCR产物的连接 | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第44-45页 |
| ·制备感受态细胞 | 第44页 |
| ·转化 | 第44-45页 |
| ·菌落PCR鉴定重组子 | 第45页 |
| ·提取重组质粒(质粒小提试剂盒) | 第45-46页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第46-47页 |
| ·双酶切体系 | 第46-47页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测质粒酶切产物 | 第47页 |
| ·重组质粒测序 | 第47页 |
| ·含重组质粒的菌种保存 | 第47页 |
| ·pMD~(?)18-T-Atdxs载体的构建 | 第47-49页 |
| ·双酶切及琼脂糖凝胶回收qdxs片段和hdxs片段 | 第47页 |
| ·T4DNA连接酶连接pMD~(?)18-T-931bp片段和hdxs片段 | 第47-48页 |
| ·转化连接液 | 第48页 |
| ·提取pMD~(?)18-T-Atdxs质粒 | 第48页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒pMD~(?)18-T-Atdxs | 第48-49页 |
| ·重组质粒pMD~(?)18-T-Atdxs的测序 | 第49页 |
| ·重组质粒pMD~(?)18-T-Atdxs菌种的保存 | 第49页 |
| ·pET-15b-Atdxs表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·双酶切及琼脂糖凝胶回收pET-15b片段和Atdxs片段 | 第49页 |
| ·T4DNA连接酶连接pET-15b片段和Atdxs片段 | 第49页 |
| ·转化连接液 | 第49页 |
| ·提取pET-15b-Atdxs质粒 | 第49-50页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒pET-15b-Atdxs | 第50页 |
| ·重组质粒pET-15b-Atdxs的测序 | 第50页 |
| ·重组质粒pET-15b-Atdxs菌种的保存 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·拟南芥幼苗提取的总RNA质量和浓度的检测结果 | 第50页 |
| ·qdxs和hdxs的克隆结果及测序分析 | 第50-51页 |
| ·pMD~(?)18-T-Atdxs质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·pET-15b-Atdxs表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53页 |
| ·讨论与展望 | 第53-54页 |
| 第四章 DXS酶异构功能的鉴定 | 第54-60页 |
| ·材料与仪器 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·主要溶液配方 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·HPLC方法检测DXS催化D-GAP生成DXP | 第55-56页 |
| ·HPLC方法检测DXS催化D-GAP异构化 | 第56-57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-59页 |
| ·HPLC方法检测DXS催化D-GAP生成DXP | 第57页 |
| ·HPLC方法检测DXS催化D-GAP异构化 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
