中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-12页 |
缩略词表 | 第12-14页 |
前言 | 第14-16页 |
文献回顾 | 第16-44页 |
一.HSP90的生物学特性及功能 | 第16-22页 |
二.HSP90与肿瘤 | 第22-24页 |
三.热休克蛋白与肿瘤耐药 | 第24-27页 |
四.肿瘤多药耐药的机制 | 第27-39页 |
五.肿瘤多药耐药的逆转 | 第39-44页 |
第一部分 热休克蛋白HSP90β在人胃癌组织及耐药细胞系中的表达 | 第44-62页 |
材料和方法 | 第44-52页 |
结果 | 第52-59页 |
讨论 | 第59-62页 |
第二部分 反义HSP90mRNA对消化系肿瘤细胞药物敏感性的影响 | 第62-151页 |
主要仪器设备及实验材料 | 第62-68页 |
主要实验方法 | 第68-90页 |
一.反义HSP90mRNA真核表达载体的构建 | 第68-74页 |
二.重组质粒的转染及阳性克隆的筛选 | 第74-75页 |
三.转染细胞的分子生物学鉴定(RNA表达的检测) | 第75-80页 |
四.Western blot | 第80-84页 |
五.转染细胞的形态和生长速度观察 | 第84页 |
六.细胞周期分析 | 第84页 |
七.体外药物敏感实验 | 第84-85页 |
八.FCM测定细胞内药物浓度 | 第85页 |
九.GST活性测定 | 第85-87页 |
十.拓扑异构酶活性测定 | 第87-90页 |
实验结果 | 第90-136页 |
一.反义HSP90mRNA真核表达载体pcDNA-HSP90的酶切鉴定 | 第90-91页 |
二.转染细胞的抗性筛选及挑选阳性克隆 | 第91-94页 |
三.转染细胞的分子生物学特性(mRNA的表达) | 第94-96页 |
四.基因转染后对细胞HSP90蛋白表达的影响 | 第96-101页 |
五.基因转染后对各细胞系生物学行为的影响 | 第101-136页 |
1.转染细胞的形态变化 | 第101-103页 |
2.转染细胞的生长曲线 | 第103-106页 |
3.转染细胞细胞周期改变 | 第106-110页 |
4.转染细胞药物敏感性实验 | 第110-121页 |
5.FCM测定细胞内阿霉素含量 | 第121-125页 |
6.转染细胞P-GP的表达 | 第125-128页 |
7.转染细胞TOPOⅡ的表达 | 第128-133页 |
8.转染细胞GST活性改变 | 第133-134页 |
9.转染细胞TOPOⅡ活性改变 | 第134-136页 |
讨论 | 第136-151页 |
致谢 | 第151-152页 |
参考文献 | 第152-159页 |
发表论文 | 第159页 |