| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略语 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 上篇 文献综述 | 第20-48页 |
| 第一章 OPG/RANKL/RANK系统与骨质疏松症的研究进展 | 第20-40页 |
| 1 OPG/RANKL/RANK系统 | 第20-22页 |
| ·骨保护素(OPG) | 第20-21页 |
| ·核因子-κB受体活化因子配体(RANKL) | 第21-22页 |
| ·核因子-κB受体活化因子(RANK) | 第22页 |
| 2 成骨细胞与破骨细胞之间的作用 | 第22-29页 |
| ·成骨、破骨细胞与骨质疏松症 | 第22-23页 |
| ·成骨、破骨细胞与OPG/RANKL/RANK系统 | 第23-27页 |
| ·细胞因子与OPG/RANKL/RANK系统 | 第27-29页 |
| 3 OPG/RANKL/RANK系统与骨质疏松症 | 第29-34页 |
| ·OPG/RANKL/RANK系统与绝经后骨质疏松 | 第30-31页 |
| ·OPG/RANKL/RANK系统与老年性骨质疏松 | 第31-32页 |
| ·OPG/RANKL/RANK系统与药物性骨质疏松 | 第32-33页 |
| ·OPG/RANKL/RANK系统与废用性骨质疏松 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-40页 |
| 第二章 骨质疏松症药物——OPG研究进展 | 第40-48页 |
| 1 重组OPG蛋白的应用 | 第40-41页 |
| 2 OPG基因治疗 | 第41-44页 |
| ·选择载体 | 第42页 |
| ·基因转移形式 | 第42-43页 |
| ·OPG基因治疗 | 第43-44页 |
| 3 展望 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 下篇 试验研究 | 第48-130页 |
| 第三章 鸡骨保护素(chOPG)的亚克隆及pcDNA3.1(+)-chOPG真核重组质粒的构建 | 第48-64页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| ·宿主菌和质粒载体 | 第48-49页 |
| ·工程酶与试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·引物设计 | 第50页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第50页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第50-52页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-chOPG鉴定和PCR扩增产物序列测定 | 第52-53页 |
| ·构建pcDNA3.1(+)-chOPG | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| ·鸡OPG ORF基因的PCR结果 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pMD18-T-chOPG的构建及双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·真核重组质粒pcDNA3.1(+)-chOPG的构建及鉴定 | 第56-57页 |
| ·chOPG DNA测序结果 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 第四章 质粒pcDNA3.1(+)-chOPG体外转染成纤维细胞表达的研究 | 第64-80页 |
| 1 材料 | 第64-66页 |
| ·试验动物 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-72页 |
| ·pcDNA3.1(+)-chOPG重组质粒的大量制备 | 第66页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEFs)的培养 | 第66-67页 |
| ·脂质体2000介导pcDNA3.1(+)-chOPG瞬时转染CEFs | 第67页 |
| ·RT-PCR检测CEFs中chOPG mRNA转录水平 | 第67-68页 |
| ·间接免疫荧光试验检测CEFs中chOPG基因的表达产物 | 第68-69页 |
| ·Western Blot检测转染CEFs内chOPG蛋白的表达情况 | 第69-71页 |
| ·ELISA法检测转染CEFs上清液中表达产物含量 | 第71-72页 |
| ·数据统计及分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-75页 |
| ·pcDNA3.1(+)-chOPG重组质粒的纯度和浓度检测 | 第72页 |
| ·原代培养的CEFs形态 | 第72页 |
| ·脂质体法转染效果 | 第72页 |
| ·RT-PCR检测CEFs中chOPG mRNA转录水平 | 第72-74页 |
| ·重组质粒转染CEFs后chOPG蛋白的表达 | 第74-75页 |
| ·ELISA法检测转染细胞上清液中表达产物含量 | 第75页 |
| 4 讨论 | 第75-76页 |
| 5 小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 第五章 chOPG重组蛋白对体外培养鸡胚破骨细胞凋亡、骨吸收功能的影响 | 第80-94页 |
| 1 材料 | 第81-82页 |
| ·试验动物 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81页 |
| ·主要仪器 | 第81-82页 |
| 2 方法 | 第82-83页 |
| ·OC培养鉴定 | 第82页 |
| ·OC凋亡测定 | 第82-83页 |
| ·OC抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性测定 | 第83页 |
| ·OC骨吸收功能的变化 | 第83页 |
| ·数据统计及分析 | 第83页 |
| 3 结果 | 第83-87页 |
| ·OC形态 | 第84-85页 |
| ·OC凋亡测定 | 第85页 |
| ·OC抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性变化 | 第85-86页 |
| ·OC骨陷窝数量和面积的变化 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-88页 |
| 5 小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 第六章 chOPG外源蛋白的表达及其在蛋鸡不同组织中的分布 | 第94-110页 |
| 1 材料 | 第94-95页 |
| ·主要试剂 | 第94-95页 |
| ·主要仪器 | 第95页 |
| ·试验动物 | 第95页 |
| ·样品采集 | 第95页 |
| 2 方法 | 第95-97页 |
| ·RT-PCR检测注射部位骨骼肌中chOPG mRNA转录水平 | 第95页 |
| ·Western Blot检测注射部位骨骼肌中chOPG蛋白的表达情况 | 第95-96页 |
| ·PCR分析组织中的质粒pcDNA3.1(+)-chOPG的分布与残留 | 第96页 |
| ·组织切片 | 第96-97页 |
| ·数据统计及分析 | 第97页 |
| 3 结果 | 第97-104页 |
| ·注射部位骨骼肌中chOPG mRNA转录水平 | 第97-99页 |
| ·注射部位骨骼肌中chOPG蛋白的表达情况 | 第99页 |
| ·组织中的质粒pcDNA3.1(+)-chOPG的分布与残留 | 第99-101页 |
| ·主要器官组织病理学变化 | 第101-104页 |
| 4 讨论 | 第104页 |
| 5 小结 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-110页 |
| 第七章 质粒pcDNA3.1(+)-chOPG对产蛋后期ISA蛋鸡生产性能和骨代谢的影响 | 第110-130页 |
| 1 材料 | 第111-112页 |
| ·试剂 | 第111页 |
| ·主要仪器 | 第111页 |
| ·试验动物 | 第111页 |
| ·样品采集、保存 | 第111-112页 |
| 2 方法 | 第112-113页 |
| ·测定指标 | 第112-113页 |
| ·数据统计与分析 | 第113页 |
| 3 结果 | 第113-124页 |
| ·ISA蛋鸡血浆钙、磷和碱性磷酸酶的变化 | 第113-117页 |
| ·ISA蛋鸡产蛋量、软破壳蛋数量的变化 | 第117-119页 |
| ·ISA蛋鸡蛋壳厚度、强度的变化 | 第119-121页 |
| ·ISA蛋鸡骨生物力学性能、放射骨密度的变化 | 第121-124页 |
| 4 讨论 | 第124-125页 |
| 5 小结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-130页 |
| 全文结论 | 第130-131页 |
| 本文创新之处 | 第131-132页 |
| 攻读博士学位期间发表论文和参加学术会议 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
