| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| ·青蒿素(ARTEMISININ) | 第13-18页 |
| ·青蒿素及其衍生物的研究历史 | 第13-14页 |
| ·化学结构、物理性质 | 第14-15页 |
| ·作用机制及药理作用 | 第15-17页 |
| ·作用机制 | 第15-16页 |
| ·其他药理作用 | 第16-17页 |
| ·青蒿素的来源 | 第17-18页 |
| ·野生黄花蒿中提取 | 第17页 |
| ·青蒿素的全合成 | 第17页 |
| ·组织培养 | 第17-18页 |
| ·青蒿素的生物合成 | 第18页 |
| ·青蒿素生物合成研究进展 | 第18-20页 |
| ·植物中青蒿素合成过程的研究 | 第18页 |
| ·青蒿素生物合成研究过程 | 第18-20页 |
| ·本论文的实验设计思路 | 第20-22页 |
| ·研究意义 | 第20页 |
| ·研究基础 | 第20页 |
| ·实验设计 | 第20-22页 |
| ·紫穗槐烯酵母工程菌的构建 | 第20-21页 |
| ·SQS反义RNA表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·转化紫穗槐烯酿酒酵母工程菌 | 第22页 |
| ·反义mRNA检测 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第24-51页 |
| ·材料 | 第24-37页 |
| ·工具酶类 | 第24页 |
| ·试剂盒 | 第24-25页 |
| ·分子量标准 | 第25页 |
| ·培养基成分 | 第25页 |
| ·其他PCR相关试剂 | 第25页 |
| ·其他试剂 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第26-33页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·溶液 | 第27-33页 |
| ·生物信息学软件 | 第33-34页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第34-36页 |
| ·抗生素 | 第36-37页 |
| ·氨基酸及生长物质 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-50页 |
| ·大肠杆菌相关实验方法 | 第37-44页 |
| ·与酿酒酵母相关的实验操作 | 第44-48页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母感受态的制备 | 第45页 |
| ·酿酒酵母转化 | 第45-46页 |
| ·酵母工程菌的筛选 | 第46页 |
| ·酵母工程菌的发酵培养 | 第46页 |
| ·酵母总DNA的提取(酸化玻璃珠法) | 第46-47页 |
| ·酿酒酵母总RNA的提取 | 第47页 |
| ·RT-PCR | 第47-48页 |
| ·蛋白分析与纯化相关技术 | 第48-50页 |
| ·不同饱和度硫酸铵分级盐析 | 第48页 |
| ·蛋白的透析处理 | 第48-49页 |
| ·His-Tag对蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第三章 SQS反义RNA对紫穗槐烯酵母工程菌生物合成的影响 | 第51-71页 |
| ·实验方法 | 第51-57页 |
| ·整合型紫穗槐烯合酶基因酵母工程菌的构建 | 第51页 |
| ·整合载体pADSλ和pADSmλ的构建 | 第51页 |
| ·整合载体pADSλ的构建 | 第51页 |
| ·整合载体pADSmλ的构建 | 第51页 |
| ·整合型紫穗槐烯酵母工程菌的构建 | 第51-53页 |
| ·整合载体pADSλ和pADSmλ对酿酒酵母的转化 | 第51-52页 |
| ·紫穗槐烯酵母工程菌鉴定 | 第52-53页 |
| ·W303A[pADSλ]酵母工程菌发酵及产物鉴定 | 第53-54页 |
| ·附加体型和整合型ADS工程菌产率对比 | 第54页 |
| ·SQS反义RNA表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·基因克隆 | 第54页 |
| ·SQS反义RNA表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·pYeD/SQS1构建 | 第54页 |
| ·pYeD/SQS7构建 | 第54页 |
| ·pYeD/SQS3*4构建 | 第54页 |
| ·pYeD/SQS5*6构建 | 第54-55页 |
| ·SQS反义RNA表达载体转化AD酵母工程菌 | 第55页 |
| ·含SQS反义表达载体的AD酵母工程菌鉴定 | 第55-57页 |
| ·PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·GC-MS鉴定 | 第56页 |
| ·实时定量PCR | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57-69页 |
| ·紫穗槐烯酵母工程菌的构建 | 第57-63页 |
| ·酿酒酵母整合载体pADSλ和pADSmλ的构建 | 第57-60页 |
| ·pMECAURAλ1的鉴定 | 第60-61页 |
| ·pMECAURAλ的鉴定 | 第61页 |
| ·pGEMA/ADS的鉴定 | 第61-62页 |
| ·pADSλ的鉴定 | 第62页 |
| ·pGEMA/ADSm的鉴定 | 第62-63页 |
| ·pADSmλ的鉴定 | 第63页 |
| ·整合型紫穗槐烯酵母工程菌鉴定 | 第63-64页 |
| ·紫穗槐烯酵母工程菌中尿嘧啶基因的反相筛选 | 第64页 |
| ·酵母工程菌的紫穗槐烯产率 | 第64-66页 |
| ·整合型与附加体型工程菌紫穗槐烯产率的对比 | 第66-67页 |
| ·SQS反义RNA表达载体的构建 | 第67页 |
| ·含SQS反义RNA表达载体的AD酵母工程菌鉴定 | 第67-69页 |
| ·PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·GC-MS鉴定 | 第68-69页 |
| ·实时定量PCR | 第69页 |
| ·引物设计 | 第69页 |
| ·实时定量预实验 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 重组SARS-COV未知功能小蛋白表达、纯化及抗体制备 | 第71-82页 |
| ·前言 | 第71-73页 |
| ·冠状病毒 | 第71页 |
| ·SARS-CoV病毒的基因序列 | 第71-72页 |
| ·关于SARS-CoV基因组编码的蛋白 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·X4、X5和ORF10基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第73-74页 |
| ·X5、ORF10蛋白的纯化 | 第74-75页 |
| ·待纯化样品的准备 | 第74页 |
| ·层析柱的准备和上样 | 第74页 |
| ·冲柱 | 第74页 |
| ·咪唑梯度洗脱 | 第74页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第74-75页 |
| ·透析 | 第75页 |
| ·浓缩 | 第75页 |
| ·蛋白定量 | 第75页 |
| ·重组X5和ORF10蛋白的LC-ESI-MS/MS鉴定 | 第75页 |
| ·X5蛋白的抗体制备和Western Blot鉴定 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-79页 |
| ·X4、X5和ORF10基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第75-76页 |
| ·重组X5和ORF10蛋白纯化 | 第76-77页 |
| ·LC-ESI-MS/MS结果 | 第77-78页 |
| ·蛋白纯化、定量 | 第78-79页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| ·关于ORF10蛋白 | 第79页 |
| ·关于X5蛋白 | 第79页 |
| ·关于融合蛋白 | 第79-80页 |
| ·关于蛋白纯化 | 第80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 第五章 全文总结 | 第82-83页 |
| 第六章 反义RNA技术及应用(综述) | 第83-89页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
