| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-38页 |
| ·水稻瘤矮病毒研究进展 | 第13-33页 |
| ·病害的分布与危害 | 第13页 |
| ·病害的传毒介体及其传毒特性 | 第13-14页 |
| ·血清学 | 第14页 |
| ·病毒粒体结构与特性 | 第14-17页 |
| ·病毒粒体结构 | 第15-16页 |
| ·粒体特性 | 第16-17页 |
| ·病毒粒体的定位及昆虫介体细胞间的扩散 | 第17页 |
| ·病毒的基因组结构 | 第17-22页 |
| ·病毒基因组的编码策略 | 第18-20页 |
| ·病毒的基因组特性 | 第20-22页 |
| ·病毒编码的蛋白及功能 | 第22-32页 |
| ·病毒粒体结构蛋白的定位 | 第22-24页 |
| ·RGDV编码的蛋白及其同源蛋白 | 第24-25页 |
| ·病毒编码的结构蛋白 | 第25-30页 |
| ·病毒编码的非结构蛋白 | 第30-32页 |
| ·病毒基因组的转录、复制和组装 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的表达及亚细胞定位 | 第33-36页 |
| ·蛋白质的表达 | 第33-35页 |
| ·蛋白质在大肠杆菌中表达 | 第34页 |
| ·蛋白质在昆虫细胞中表达 | 第34-35页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-48页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·毒源 | 第38页 |
| ·菌株和细胞 | 第38页 |
| ·质粒 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-48页 |
| ·cDNA的合成 | 第39-40页 |
| ·PCR技术 | 第40页 |
| ·PCR产物纯化 | 第40-41页 |
| ·DNA克隆技术 | 第41-42页 |
| ·连接 | 第41页 |
| ·感受态细胞制备 | 第41-42页 |
| ·转化 | 第42页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第42-43页 |
| ·质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR鉴定 | 第43页 |
| ·酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒DNA的转座与昆虫细胞的转染 | 第43-44页 |
| ·重组质粒DNA的转座 | 第43页 |
| ·重组Bacmid DNA的提取与制备 | 第43-44页 |
| ·重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第44页 |
| ·重组病毒的效价测定 | 第44页 |
| ·内层衣壳蛋白基因甜在大肠杆菌中的表达和抗体制备 | 第44-46页 |
| ·诱导表达 | 第44-45页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第45页 |
| ·间接ELISA法测定抗血清效价 | 第45-46页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳与Western印迹分析 | 第46-47页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第46-47页 |
| ·电转移 | 第47页 |
| ·Western印迹分析 | 第47页 |
| ·重组病毒表达产物的电镜观察 | 第47-48页 |
| 3 RGDV内层衣壳蛋白基因S3在大肠杆菌中的表达和抗体制备 | 第48-57页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·RGDV-dsRNA的提取和纯化 | 第48-49页 |
| ·内层衣壳蛋白基因S3的克隆 | 第49页 |
| ·原核表达载体构建 | 第49页 |
| ·诱导表达 | 第49-50页 |
| ·抗体制备和Western印迹 | 第50页 |
| ·抗血清效价测定 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·RGDV-dsRNA的提取和纯化 | 第50页 |
| ·内层衣壳蛋白基因S3的克隆 | 第50-51页 |
| ·原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·利用pET-32a载体在大肠杆菌中表达His融合蛋白 | 第52-54页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第54页 |
| ·抗血清的效价测定 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 4 水稻瘤矮病毒核心样颗粒和病毒样颗粒的组装 | 第57-77页 |
| ·材料与方法 | 第57-61页 |
| ·质粒与试剂 | 第57-58页 |
| ·菌株与细胞 | 第58页 |
| ·杆状病毒转移载体构建 | 第58-59页 |
| ·重组杆状病毒转移载体pFB-S3和pFB-S8的构建 | 第58-59页 |
| ·重组杆状病毒双价转移载体pFD-S3/S8的构建 | 第59页 |
| ·重组Bacmid DNA提取与鉴定 | 第59-60页 |
| ·昆虫细胞转染及重组病毒的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·重组蛋白的表达与Western blot检测 | 第60-61页 |
| ·核心样颗粒和病毒样颗粒的电镜观察 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-70页 |
| ·杆状病毒转移载体构建 | 第61-64页 |
| ·重组杆状病毒转移载体pFB-S3和pFB-S8的构建 | 第61-63页 |
| ·重组杆状病毒双价转移载体pFD-S3/S8的构建 | 第63-64页 |
| ·重组Bacmid DNA提取与鉴定 | 第64-66页 |
| ·昆虫细胞转染及重组病毒的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白的表达与Western blot检测 | 第67-68页 |
| ·核心样颗粒和病毒样颗粒的电镜观察 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-77页 |
| ·Bac-to-Bac表达系统的选择 | 第70-71页 |
| ·双价表达载体构建 | 第71-72页 |
| ·影响表达的因素与目的蛋白的收获 | 第72-73页 |
| ·核心样颗粒及病毒样颗粒的形成与作用 | 第73-77页 |
| 5 水稻瘤矮病毒Pns12蛋白的亚细胞定位 | 第77-91页 |
| ·材料与方法 | 第77-81页 |
| ·质粒与试剂 | 第77-78页 |
| ·RGDV Pns12蛋白的结构功能域预测 | 第78页 |
| ·GFP与S12基因的连接与克隆 | 第78-80页 |
| ·重组杆状病毒转移载体的构建 | 第80-81页 |
| ·重组杆粒DNA(Bacmid)的提取与鉴定 | 第81页 |
| ·昆虫细胞转染和培养 | 第81页 |
| ·共聚焦显微镜观察 | 第81页 |
| ·结果与分析 | 第81-87页 |
| ·RGDV Pns12蛋白的结构功能域预测 | 第81-82页 |
| ·GFP与S12基因及其突变体的连接与克隆 | 第82页 |
| ·重组杆状病毒转移载体的构建 | 第82-84页 |
| ·重组穿梭质粒的构建与鉴定 | 第84-85页 |
| ·Pns12蛋白在昆虫细胞中的定位 | 第85-86页 |
| ·Pns12蛋白亚细胞定位信号的初步研究 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-91页 |
| 总结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 附录1 缩写词与中英文对照 | 第107-109页 |
| 附录2 常用缓冲液及培养基配方 | 第109-114页 |
| 附录3 攻博期间发表(投稿)的论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
