| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 黄曲霉病研究进展 | 第12-15页 |
| ·黄曲霉及黄曲霉毒素 | 第12-13页 |
| ·黄曲霉侵染花生的机理 | 第13页 |
| ·当今解决花生黄曲霉污染的主要途径 | 第13-15页 |
| ·在耕作和储藏时的防治 | 第13-14页 |
| ·通过传统育种方法的防治 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素污染的生物防治方法 | 第15页 |
| ·基因工程手段在花生抗黄曲霉上的应用 | 第15页 |
| 2 花生黄曲霉抗性基因的研究 | 第15-20页 |
| ·植物抗真菌病的途径和机制 | 第15-16页 |
| ·植物抗真菌蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| ·与本试验相关的抗性蛋白的研究和应用 | 第18-20页 |
| 3 花生转基因技术 | 第20-21页 |
| ·花生植株再生技术 | 第20页 |
| ·农杆菌介导转化原理 | 第20-21页 |
| 4 本研究的内容与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 抗病基因的克隆与序列分析 | 第23-37页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·动物材料 | 第23页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第23页 |
| ·试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·构建原核表达载体所用的引物 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·提取兔子胰脏的总RNA与RT-PCR | 第24-25页 |
| ·PCR产物的扩增和回收 | 第25-26页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第28页 |
| 2. 结果与分析 | 第28-35页 |
| ·实验材料DNA与RNA的提取结果 | 第28-29页 |
| ·目的基因PCR结果 | 第29页 |
| ·目的片段的转化与鉴定 | 第29-31页 |
| ·目的片段的测序结果与分析 | 第31-35页 |
| ·测序结果 | 第31-33页 |
| ·对测序结果的分析(峰图见附录2) | 第33-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| ·关于RNA污染的问题 | 第35-36页 |
| ·胶回收问题 | 第36-37页 |
| 第三章 原核表达及蛋白质体外抗性鉴定 | 第37-46页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·试剂和仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·优化诱导条件 | 第37-38页 |
| ·表达产物的粗提 | 第38页 |
| ·表达产物的溶解 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第39-40页 |
| ·蛋白质复性 | 第40页 |
| ·抗性蛋白体外抑菌实验 | 第40-41页 |
| 2. 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·优化表达条件 | 第41页 |
| ·确定了目的蛋白在体细胞中的位置分布 | 第41-42页 |
| ·抑菌结果分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| ·原核表达的优化 | 第43页 |
| ·抑菌结果讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 植物表达载体的构建与转化农杆菌 | 第46-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种和载体 | 第46页 |
| ·试剂和仪器 | 第46-47页 |
| ·植物表达载体所需的引物 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·质粒的提取 | 第47页 |
| ·PCR产物的扩增和回收 | 第47-48页 |
| ·酶切、连接与转化 | 第48页 |
| ·重组植物表达载体的鉴定 | 第48页 |
| ·液氮冻融法制备农杆菌(C58)感受态细胞及转化和菌落PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 2. 结果与分析 | 第49-50页 |
| ·目的片段的转化与鉴定 | 第49-50页 |
| ·测序结果与分析 | 第50页 |
| 3. 讨论 | 第50-51页 |
| ·转化效率低的问题 | 第50-51页 |
| 第五章 组织培养法及转基因植株的分子鉴定 | 第51-56页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·试剂和仪器 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·外植体材料准备 | 第52页 |
| ·工程菌液的制备 | 第52页 |
| ·转化程序 | 第52-53页 |
| ·分子检测 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-54页 |
| ·不定芽的抗性筛选与生根 | 第53-54页 |
| ·DNA分子水平的检测 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·关于农杆菌中质粒丢失的问题 | 第54页 |
| ·关于褐化问题 | 第54-55页 |
| ·污染的问题 | 第55-56页 |
| 前景和展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录1. | 第62-63页 |
| 附录2. | 第63-67页 |
| 附录3.本试验所用Marker | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |