| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 一、本论文的研究背景和立题依据 | 第8页 |
| 二、本论文的研究内容和意义 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 一、RNA 干涉研究进展 | 第9-11页 |
| （一） RNA 干涉的发现 | 第9页 |
| （二） RNA 干涉的机制 | 第9-10页 |
| （三） RNA 干涉的特点 | 第10-11页 |
| （四） RNA 干涉的生物学意义 | 第11页 |
| 二、反义寡聚核甘酸的研究进展 | 第11-13页 |
| （一） 反义寡聚核甘酸的发现 | 第11页 |
| （二） 反义寡聚核甘酸的来源 | 第11-12页 |
| （三） 反义寡聚核甘酸的作用机理 | 第12页 |
| （四） 反义寡聚核甘酸的应用 | 第12-13页 |
| 三、Elongator 的研究进展 | 第13-16页 |
| （一） 酵母 Elongator 复合物 | 第13-16页 |
| （二） 人的 Elongator 复合物 | 第16页 |
| 四、热休克蛋白的生物学功能及其表达调控 | 第16-23页 |
| （一） 热休克蛋白的发现，分类及生物学功能 | 第16-17页 |
| （二） 热休克蛋白的表达调控 | 第17-20页 |
| （三） Hsp70 家族 | 第20-22页 |
| （四） 热休克蛋白的研究展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-35页 |
| 一、实验材料 | 第23页 |
| （一） 细胞培养及其培养试剂 | 第23页 |
| （二） 细胞转染及体外 RNA 转录试剂 | 第23页 |
| （三） RT-PCR 相关试剂 | 第23页 |
| （四） 实验设备及仪器 | 第23页 |
| 二、实验方法 | 第23-35页 |
| （一） 选择siRNAs 序列 | 第23-24页 |
| （二） PCR 获得体外转录模板 | 第24-25页 |
| （三） 体外转录获得dsRNA | 第25-26页 |
| （四） Shortcut RNase III 酶切dsRNA 获得siRNAs | 第26-27页 |
| （五） 反义寡核甘酸的合成 | 第27页 |
| （六） 293T 细胞培养及siRNAs 或寡核甘酸转染细胞 | 第27页 |
| （七） 哺乳动物细胞总 RNA 的提取 | 第27-29页 |
| （八） 逆转录 PCR (RT-PCR) | 第29页 |
| （九） SDS-PAGE 电泳及 Western Blotting | 第29-30页 |
| （十） 酶联免疫吸附实验 | 第30-31页 |
| （十一） 染色质免疫沉淀实验 | 第31-33页 |
| （十二） PCR 和荧光适时定量 Realtime PCR | 第33-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-45页 |
| 一、应用 RNase III 酶切dsRNA 方法引发 RNAi | 第35-37页 |
| （一） 获得siRNA 混合片段 | 第35-37页 |
| （二） RNAi 抑制hELP3 基因表达的 RT－PCR 结果分析 | 第37页 |
| 二、应用反义寡核甘酸 | 第37-45页 |
| （一） 利用反义寡核苷酸抑制hELP3 mRNA 和蛋白水平的表达 | 第37-39页 |
| （二） 细胞内hElp3 水平的降低可抑制hsp70-2 的表达 | 第39-40页 |
| （三） hElp3 被招募到hsp70-2 基因上 | 第40-41页 |
| （四） hElp3 影响hsp70-2 上组蛋白 H3 的乙酰化 | 第41-43页 |
| （五） hElp3 影响 RNAPII 在hsp70-2 上的延伸 | 第43-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-48页 |
| 一、siRNA 干涉方法失败的原因 | 第45页 |
| 二、选择设计合适的反义寡聚核甘酸片段 | 第45页 |
| 三、hsp70-2 基因上转录通过染色质模板的机制 | 第45-46页 |
| 四、hElp3 调控hsp70-2 基因转录的机制 | 第46-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第56页 |
