| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-16页 |
| 一、骨组织工程种子细胞研究内容与现状 | 第10-11页 |
| 二、孤雌胚胎干细胞(pharthenotic embryonic stem cells,pESCs)的研究概况 | 第11-12页 |
| 三、pESCs作为骨组织工程种子细胞的优势 | 第12页 |
| 四、pESCs向成骨细胞诱导的研究现状 | 第12-14页 |
| 五、实验设计和实验目的 | 第14-16页 |
| 1. pESCs的体外培养及全能性鉴定 | 第14页 |
| 2. pESCs向成骨细胞的定向诱导及鉴定 | 第14页 |
| 3. 诱导pESCs的三维培养 | 第14-16页 |
| 第二章 实验内容 | 第16-53页 |
| 实验一 pESCs的体外培养及全能性鉴定 | 第16-32页 |
| 1 材料 | 第16-18页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·实验器材和试剂 | 第16-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-26页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)的分离和培养 | 第18-20页 |
| ·MEF的分离和培养 | 第18-19页 |
| ·MEF的传代 | 第19页 |
| ·MEF的冻存 | 第19页 |
| ·MEF饲养层的制备 | 第19页 |
| ·相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·pESCs的体外培养 | 第20-21页 |
| ·pESCs的培养 | 第20页 |
| ·pESCs的传代 | 第20页 |
| ·pESCs的冻存 | 第20页 |
| ·pESCs的复苏 | 第20-21页 |
| ·相关试剂的配制 | 第21页 |
| ·pESCs全能性的检测 | 第21-26页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第21页 |
| ·免疫组化检测全能性标记物 | 第21页 |
| ·全能性基因检测 | 第21-25页 |
| ·pESCs体内分化能力检测 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-29页 |
| ·MEF的形态学观察 | 第26页 |
| ·pESCs的形态学观察 | 第26-27页 |
| ·pESCs全能性的检测 | 第27-29页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第27页 |
| ·免疫组化检测全能性标记物 | 第27-28页 |
| ·全能性基因检测 | 第28-29页 |
| ·pESCs体内分化能力检测 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 实验二 pESCs向成骨细胞的定向诱导及鉴定 | 第32-47页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验器材和试剂 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-37页 |
| ·6孔细胞培养板的处理 | 第33页 |
| ·pESCs向成骨细胞定向诱导培养 | 第33-34页 |
| ·相关溶液的配制 | 第34页 |
| ·诱导后细胞形态学变化观察 | 第34页 |
| ·RT-PCR检测成骨细胞相关基因 | 第34-36页 |
| ·茜素红染色 | 第36页 |
| ·von Kossa染色 | 第36-37页 |
| ·透射电镜观察 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-43页 |
| ·成骨细胞条件培养基体外诱导pESCs | 第37页 |
| ·诱导后细胞形态学变化观察 | 第37-40页 |
| ·RT-PCR检测成骨细胞相关基因 | 第40-41页 |
| ·茜素红染色 | 第41页 |
| ·von Kossa染色 | 第41-42页 |
| ·透射电镜观察 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 实验三 诱导pESCs的三维培养 | 第47-53页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验器材和试剂 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-48页 |
| ·诱导pESCs的三维培养 | 第47页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第47-48页 |
| ·扫描电镜检测 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-51页 |
| ·诱导pESCs的三维培养 | 第48页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第48-49页 |
| ·扫描电镜检测 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 中英文对照表 | 第61-62页 |
| 科研成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |