摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-9页 |
1. 文献综述 | 第9-22页 |
·整合素的功能及其信号转导通路 | 第9-15页 |
·RGD 肽及其整合素受体家族 | 第9-10页 |
·整合素的功能及其信号转导通路 | 第10-11页 |
·整合素簇与信号复合体 | 第11-13页 |
·整合素在肿瘤发生中的作用 | 第13-14页 |
·整合素与血管新生 | 第14-15页 |
·整合素和血管生长因子 | 第15页 |
·RGD 肽的功能和作用机制 | 第15-22页 |
·抑制血小板粘附、聚集,抗血栓形成 | 第16-17页 |
·RGD 肽对肿瘤的抑制作用 | 第17-19页 |
·RGD 肽促进骨组织再生 | 第19-21页 |
·抑制视网膜色素上皮细胞引起的牵引性视网膜脱落 | 第21-22页 |
2. RGD毒素肽 Lampetrin1 的基因克隆与序列分析 | 第22-32页 |
·材料 | 第22页 |
·动物材料 | 第22页 |
·试剂 | 第22页 |
·方法 | 第22-29页 |
·引物设计 | 第22页 |
·利用 RT-PCR 方法获取目的基因 | 第22-24页 |
·目的基因的克隆 | 第24-27页 |
·cDNA 序列及其编码蛋白质的计算机分析 | 第27-29页 |
·结果 | 第29-30页 |
·RT-PCR 结果 | 第29-30页 |
·阳性转化子的 PCR 筛选与双酶切鉴定 | 第30页 |
·cDNA 测序结果及由cDNA 序列推导的氨基酸序列 | 第30页 |
·讨论 | 第30-32页 |
3. RGD 毒素肽Lampetrin1 的诱导表达、鉴定与纯化 | 第32-38页 |
·材料 | 第32页 |
·方法 | 第32-35页 |
·pET23b-Lampetrin1 转化入表达菌 | 第32页 |
·对重组表达菌的鉴定 | 第32页 |
·对重组菌进行不同时间与温度梯度的 IPTG 诱导表达 | 第32-33页 |
·蛋白的诱导表达、提取及鉴定 | 第33页 |
·Tricine-SDS PAGE鉴定 | 第33-34页 |
·重组蛋白 Lampetrin1 的纯化 | 第34-35页 |
·采用 Brodford 检测法进行纯化蛋白的浓度测定 | 第35页 |
·结果 | 第35-37页 |
·对重组菌进行时间梯度与温度梯度的 IPTG 诱导表达 | 第35-36页 |
·蛋白质电泳 | 第36页 |
·蛋白质纯化结果 | 第36-37页 |
·蛋白标准曲线的绘制 | 第37页 |
·纯化蛋白的浓度和产量 | 第37页 |
·讨论 | 第37-38页 |
·结论 | 第38页 |
4. Lampetrin1 的生物学活性 | 第38-54页 |
·Lampetrin1 对兔血小板聚集的抑制作用 | 第39-42页 |
·材料 | 第39页 |
·方法 | 第39-40页 |
·结果 | 第40页 |
·讨论 | 第40-42页 |
·结论 | 第42页 |
·血管生成的体内实验 | 第42-44页 |
·材料与方法 | 第42-43页 |
·结果与讨论 | 第43-44页 |
·Lampetrin1 对肿瘤细胞的作用 | 第44-54页 |
·材料 | 第45页 |
·方法 | 第45-48页 |
·结果 | 第48-53页 |
·讨论 | 第53-54页 |
5. Lampetrin1 多克隆抗体的制备 | 第54-59页 |
·材料与方法 | 第54-55页 |
·器材 | 第54页 |
·试剂 | 第54页 |
·兔子的选择 | 第54页 |
·方法 | 第54-55页 |
·血清的分离 | 第55页 |
·Western Blotting 检测 | 第55-59页 |
·材料 | 第55-56页 |
·方法 | 第56-59页 |
参考文献 | 第59-65页 |
附录 | 第65-66页 |
致谢 | 第66-67页 |