| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一部分：前言 | 第9-12页 |
| 第二部分：材料与方法 | 第12-25页 |
| 1.材料 | 第12-16页 |
| ·菌种 | 第12页 |
| ·质粒 | 第12页 |
| ·培养基 | 第12页 |
| ·缓冲液 | 第12-13页 |
| ·工具酶 | 第13-14页 |
| ·抗体 | 第14页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第14-15页 |
| ·仪器设备 | 第15-16页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| 2.方法 | 第16-25页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第16页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第16-17页 |
| ·DNA的限制性内切酶的双酶切 | 第17页 |
| ·DNA片段的连接 | 第17页 |
| ·DNA电泳分离 | 第17页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第17-18页 |
| ·DNA PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第19页 |
| ·表达产物的鉴定及表达水平分析 | 第19页 |
| ·蛋白质存在性质的鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白在摇瓶水平表达条件的优化 | 第20-21页 |
| ·工程菌的发酵 | 第21-22页 |
| ·蛋白质的定量 | 第22页 |
| ·兔抗hGH多克隆抗体的制备 | 第22页 |
| ·抗体效价的测定——免疫双扩散法 | 第22-23页 |
| ·蛋白质纯化 | 第23-24页 |
| ·免疫印迹实验 | 第24页 |
| ·蛋白质银染纯度分析 | 第24-25页 |
| 第三部分：rhGH分泌型表达质粒的构建及其鉴定 | 第25-41页 |
| 1.引言 | 第25页 |
| 2.结果和分析 | 第25-36页 |
| ·rhGH分泌型表达质粒pET-ompA_3-hGH的构建 | 第25-28页 |
| ·重组质粒pET-ompA_3-hGH的鉴定 | 第28-29页 |
| ·rhGH标准品的定量 | 第29-31页 |
| ·溶菌酶浓度对周质蛋白提取效率的影响 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pET-ompA_3-hGH在BL21(DE3)中表达产物的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pET-hGH的构建、鉴定和表达 | 第33-36页 |
| 3.讨论 | 第36-40页 |
| 4.本章小结 | 第40-41页 |
| 第四部分：工程菌在摇瓶水平诱导表达条件的优化 | 第41-49页 |
| 1.引言 | 第41页 |
| 2.结果和分析 | 第41-46页 |
| ·培养基成分对rhGH分泌表达量的影响 | 第41-43页 |
| ·诱导条件的优化 | 第43-45页 |
| ·工程菌优选条件下的生长曲线 | 第45-46页 |
| 3.讨论 | 第46-47页 |
| 4.本章小结 | 第47-49页 |
| 第五部分：工程菌的发酵 | 第49-55页 |
| 1.引言 | 第49-50页 |
| 2.结果与分析 | 第50-53页 |
| ·工程菌的稳定性检测 | 第50-52页 |
| ·工程菌在发酵水平目的蛋白表达情况 | 第52-53页 |
| 3.讨论 | 第53-54页 |
| 4.本章小结 | 第54-55页 |
| 第六部分：分泌型表达rhGH的纯化及其性质的研究 | 第55-62页 |
| 1.引言 | 第55页 |
| 2.结果与分析 | 第55-60页 |
| ·抗体的纯化及亲和层析柱的制备 | 第55-56页 |
| ·抗体亲和层析一步纯化周质中的rhGH | 第56-58页 |
| ·纯化rhGH纯度的鉴定 | 第58-59页 |
| ·纯化rhGH相对分子量的测定 | 第59-60页 |
| ·纯化rhGH免疫活性的检测 | 第60页 |
| 3.讨论 | 第60-61页 |
| 4.本章小结 | 第61-62页 |
| 第七部分：总结 | 第62-64页 |
| 1.本研究主要获得的结果 | 第62页 |
| 2.本论文的创新之处 | 第62-63页 |
| 3.需进一步研究的问题 | 第63-64页 |
| 论文部分参考文献 | 第64-69页 |
| 综述：rhGH在大肠杆菌周质中的分泌表达 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 发表学术论文目录 | 第80页 |