| 缩写词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 糖化酶的研究背景及现状 | 第13-20页 |
| ·淀粉酶及糖化酶 | 第13-14页 |
| ·黑曲霉糖化酶 | 第14-15页 |
| ·黑曲霉糖化酶基因研究进展 | 第15-20页 |
| 2 荧光假单胞菌的研究背景及在工业发酵生产中的应用 | 第20-23页 |
| ·荧光假单胞菌形态与鉴定方法 | 第20页 |
| ·荧光假单胞菌分布 | 第20页 |
| ·荧光假单胞菌用于工业发酵生产2-酮基-D-葡萄糖酸 | 第20-21页 |
| ·利用荧光假单胞菌作为受体菌构建具有应用前景的转基因工程菌 | 第21-23页 |
| 3 目的基因的分离克隆技术 | 第23-25页 |
| ·功能蛋白组技术 | 第23页 |
| ·基因文库技术 | 第23页 |
| ·基因芯片技术 | 第23-24页 |
| ·图位基因克隆技术 | 第24页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第24-25页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第25页 |
| ·生物信息学技术 | 第25页 |
| 4 外源基因在原核系统中的表达 | 第25-28页 |
| ·表达载体的选择 | 第25-26页 |
| ·提高外源基因的mRNA和蛋白产物的稳定性 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的体外复性研究 | 第27-28页 |
| 研究背景 | 第28-29页 |
| 第一部分 黑曲霉糖化酶基因的克隆 | 第29-41页 |
| 1 实验材料 | 第29-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-36页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·PCR扩增基因 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的电泳鉴定 | 第32页 |
| ·凝胶产物回收 | 第32-33页 |
| ·外源基因与pGEM-T载体的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第33页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌DH5α(热激法) | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·DNA测序 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·PCR扩增基因 | 第36-37页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的连接、筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| ·糖化酶基因的序列测定 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第二部分 黑曲霉糖化酶基因原核表达载体pBBR1MCS-2GA利pUCP19-KGA的构建及在荧光假单胞菌AR4中的表达 | 第41-67页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| ·材料与试剂 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-50页 |
| ·原核表达载体pBBR1MCS-2GA和pUCP19-KGA的构建 | 第41-43页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第43页 |
| ·重组质粒pBBR1MCS-2GA导入荧光假单胞菌AR4 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pUCP19-KGA导入荧光假单胞菌AR4 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45页 |
| ·重组荧光假单胞菌ARW4对淀粉的水解能力分析 | 第45-46页 |
| ·不同生长条件下重组蛋白的表达情况 | 第46页 |
| ·十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第46页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第46-47页 |
| ·辛酸—硫酸铵纯化抗体 | 第47页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第47-48页 |
| ·Western blot | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-67页 |
| ·pBBR1MCS-2GA的构建 | 第50-52页 |
| ·pUCP19-KGA的构建 | 第52-56页 |
| ·pBBR1MCS-2GA导入荧光假单胞菌AR4 | 第56-57页 |
| ·pUCP19-KGA导入荧光假单胞菌AR4 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE鉴定荧光假单胞菌ARW4中糖化酶蛋白表达结果 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的分布 | 第59-60页 |
| ·重组荧光假单胞菌ARW4的酶活鉴定 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE鉴定荧光假单胞菌ARH4中糖化酶蛋白的表达结果 | 第61页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第61页 |
| ·Western blot | 第61-62页 |
| ·在无抗性选择压力下质粒的稳定性 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 研究体会及展望 | 第67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
