| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 植物基因克隆方法概述 | 第10-15页 |
| ·正向遗传学与基因克隆策略 | 第10-12页 |
| ·功能克隆 | 第10页 |
| ·表型克隆 | 第10-12页 |
| ·基因表达序列分析及基因芯片 | 第12页 |
| ·反向遗传学与基因克隆策略 | 第12-14页 |
| ·TILLING技术 | 第14页 |
| ·基因陷阱 | 第14-15页 |
| 2 植物厌氧响应相关基因的表达调控机制 | 第15-21页 |
| ·厌氧应答基因序列特点 | 第16-17页 |
| ·高等植物感受厌氧信号的模式 | 第17-19页 |
| ·厌氧响应相关基因的表达调控特点 | 第19-20页 |
| ·AtMYB2参与厌氧反应的调控 | 第20-21页 |
| 3.研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 薏苡乙醇脱氢酶(ADH1)及丙酮酸脱羧酶(PDC1)基因CDNA的克隆 | 第23-36页 |
| 1 材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·分子生物学试剂及来源 | 第23页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| ·常用缓冲液、溶液及培养基 | 第23-24页 |
| ·引物序列 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·材料种植 | 第24-25页 |
| ·总RNA的提取 | 第25页 |
| ·甲醛变性电泳检测RNA | 第25-26页 |
| ·引物的设计 | 第26页 |
| ·cDNA链的合成 | 第26页 |
| ·cDNA链质量的检测 | 第26-27页 |
| ·目的基因PCR扩增体系的建立 | 第27页 |
| ·目的基因的电泳检测 | 第27页 |
| ·PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| ·回收片段的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·转化子的筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒的快速检测 | 第29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·菌种的保存及测序 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-34页 |
| ·薏苡根部及叶片RNA提取 | 第30-31页 |
| ·cDNA的合成及其质量的检测 | 第31页 |
| ·目的基因扩增条件的优化 | 第31-32页 |
| ·薏苡ADH1及PDC1基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第33页 |
| ·序列的测定 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| ·有关薏苡RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·关于RT-PCR与质粒的转化及克隆 | 第35-36页 |
| 第三章 薏苡乙醇脱氢酶(ADH1)及丙酮酸脱羧酶(PDC1)基因CDNA的生物信息学分析 | 第36-49页 |
| 1.材料与方法 | 第36-37页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·ADH1基因核苷酸序列分析 | 第37-38页 |
| ·ADH1基因编码的氨基酸序列分析 | 第38-40页 |
| ·ADH1基因的分子进化分析 | 第40-41页 |
| ·PDC1基因核苷酸序列分析 | 第41-42页 |
| ·PDC1基因编码的氨基酸的序列分析 | 第42-46页 |
| ·PDC基因家族的分子进化分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 ADH1、PDC1基因淹水胁迫下的表达模式及酶活性变化分析 | 第49-60页 |
| 1.材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·药品与试剂 | 第49页 |
| ·引物序列 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·RNA提取及检测 | 第49页 |
| ·反转录反应 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增体系 | 第50页 |
| ·循环参数的确定 | 第50页 |
| ·ADH、PDC酶蛋白的提取 | 第50-51页 |
| ·酶活性的测定 | 第51页 |
| ·半定量分析 | 第51页 |
| ·数据处理及方差分析 | 第51页 |
| 2.结果及分析 | 第51-56页 |
| ·循环参数的确定 | 第51-53页 |
| ·薏苡根尖ADH1、PDC1基因表达的相对定量结果 | 第53-54页 |
| ·薏苡叶片ADH1、PDC1基因表达的相对定量结果 | 第54页 |
| ·ADH、PDC酶活力变化情况 | 第54-56页 |
| 3.讨论 | 第56-60页 |
| ·关于半定量RT-PCR技术 | 第56-57页 |
| ·ADH1,PDC1表达量及酶活力与耐渍性关系 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
