天麻抗真菌蛋白基因导入甘蓝型油菜的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 一 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 再生体系的建立 | 第10-11页 |
| ·子叶、下胚轴为外植体的再生体系 | 第10页 |
| ·原生质体再生体系的建立 | 第10-11页 |
| ·小孢子再生体系的建立 | 第11页 |
| 2 目的基因 | 第11-20页 |
| ·品质改良基因 | 第11-13页 |
| ·抗性基因 | 第13-18页 |
| ·雄性不育基因 | 第18-19页 |
| ·产生PHB的基因 | 第19-20页 |
| 3 转化方法 | 第20-23页 |
| ·生物介质介导的遗传转化 | 第20-21页 |
| ·PEG法 | 第21页 |
| ·激光微束穿刺法 | 第21-22页 |
| ·基因枪法 | 第22页 |
| ·电击法 | 第22页 |
| ·显微注射法和子房注射法 | 第22-23页 |
| ·真空渗入遗传转化法 | 第23页 |
| ·其他方法 | 第23页 |
| 4 转基因油菜的安全性分析 | 第23-24页 |
| 5 结论与展望 | 第24-26页 |
| 二 材料与方法 | 第26-41页 |
| 1 实验材料 | 第26-29页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·工具酶和分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第26-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-41页 |
| ·碱裂解法小量制备 E.coli质粒 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30-31页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·DNA片段的回收 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的加A反应 | 第32-33页 |
| ·酶切反应 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·E.coli的转化 | 第34页 |
| ·甘油管的制备 | 第34-35页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第35页 |
| ·农杆菌的转化 | 第35页 |
| ·种子的萌发和外植体的获得 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌-Ti质粒介导法转化油菜 | 第35-36页 |
| ·油菜总 DNA提取步骤 | 第36页 |
| ·转基因油菜的 Southern检测 | 第36-39页 |
| ·油菜 RNA提取及 DNA的去除 | 第39页 |
| ·RT-PCR(one step) | 第39-41页 |
| 三 结果与分析 | 第41-48页 |
| 1 植物表达载体的构建与验证 | 第41-43页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41页 |
| ·植物表达载体的验证 | 第41-43页 |
| 2 油菜再生体系的建立 | 第43页 |
| 3 油菜的农杆菌转化 | 第43-48页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第44-48页 |
| 四 讨论与结论 | 第48-51页 |
| 1 油菜再生体系的建立 | 第48页 |
| ·外植体的选择 | 第48页 |
| ·培养条件的优化 | 第48页 |
| 2 农杆菌转化体系的优化 | 第48-49页 |
| ·农杆菌的活化 | 第48页 |
| ·预培养时间 | 第48页 |
| ·农杆菌侵染所用的菌液浓度及侵染时间 | 第48-49页 |
| ·共培养 | 第49页 |
| ·抗生素筛选压力的选择 | 第49页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)的添加 | 第49页 |
| ·AgNO_3的添加 | 第49页 |
| 3 Southern的讨论 | 第49-50页 |
| 4 RT-PCR | 第50页 |
| 5 进一步的工作 | 第50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 缩略词 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
