| 缩略词 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 绪言 | 第11-26页 |
| ·自交不亲和性的由来及对植物的影响 | 第11-12页 |
| ·自交不亲和性的由来 | 第11页 |
| ·自交不亲和性对植物的影响 | 第11-12页 |
| ·自交不亲和性的分类及表现特征 | 第12-14页 |
| ·自交不亲和性的种类 | 第12-13页 |
| ·不同类型自交不亲和性的表现特征 | 第13-14页 |
| ·自交不亲和性的生物学研究 | 第14-18页 |
| ·自交不亲和性遗传机制 | 第14-15页 |
| ·自交不亲和性细胞生物学基础 | 第15页 |
| ·自交不亲和性分子生物学原理 | 第15-18页 |
| ·研究自交不亲和性的方法 | 第18-19页 |
| ·观察对比法 | 第18页 |
| ·花柱S糖蛋白电泳分析法 | 第18-19页 |
| ·S基因分子鉴定法 | 第19页 |
| ·解决自交不亲和问题的办法 | 第19-22页 |
| ·生物学方法 | 第19-21页 |
| ·化学处理法 | 第21页 |
| ·物理处理法 | 第21-22页 |
| ·其他克服自交不亲和的方法 | 第22页 |
| ·梨自交不亲和S基因型研究进展 | 第22-24页 |
| ·田间授粉对比分析研究 | 第22页 |
| ·S基因蛋白产物分析研究 | 第22-23页 |
| ·PCR-RFLP分析研究 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的意义及技术路线 | 第24-26页 |
| ·目的意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2. 鹅梨S基因型的确定 | 第26-44页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·PCR引物 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·梨叶片基因组 DNA提取 | 第28-29页 |
| ·纯化 DNA | 第29页 |
| ·基因组 DNA纯度及浓度测定 | 第29-30页 |
| ·S基因特异 PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR-RFLP系统分析 | 第31页 |
| ·PCR产物S片段的回收 | 第31-32页 |
| ·制备感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·S T载体连接 | 第33页 |
| ·质粒转化感受态细胞 | 第33页 |
| ·质粒 DNA抽提 | 第33-34页 |
| ·重组子的鉴定 | 第34页 |
| ·PF+PR特异扩增 | 第34-35页 |
| ·含有目的片段的菌液测序 | 第35页 |
| ·测序片段的校正分析及新序列提交 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-43页 |
| ·基因组DNA纯度及浓度测定 | 第36页 |
| ·S基因特异PCR扩增及PCR-RFLP系统分析 | 第36-37页 |
| ·电泳检测质粒 DNA浓度 | 第37页 |
| ·通用引物 PCR产物电泳检测 | 第37页 |
| ·特异扩增电泳检测 | 第37-38页 |
| ·目的片段S基因型确定 | 第38-43页 |
| ·小结与讨论 | 第43-44页 |
| 3. 3' RACE及S_(13)和S_(34)全长cDNA序列的拼接 | 第44-56页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·植物材料 | 第44-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·实验药品 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·RT-PCR及3’RACE引物 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·RNA抽提预处理及注意事项 | 第46页 |
| ·梨雌蕊总 RNA提取 | 第46-47页 |
| ·TAE电泳检测雌蕊 RNA | 第47页 |
| ·雌蕊RNA逆转录为cDNA | 第47-48页 |
| ·通过3’RACE获得S基因3’端序列 | 第48页 |
| ·产物检测 | 第48页 |
| ·PCR特异产物回收 | 第48页 |
| ·TA克隆测序 | 第48页 |
| ·测序片段的校正及分析 | 第48页 |
| ·S基因基因组序列与3’RACE序列拼接 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·TAE电泳检测雌蕊 RNA | 第49页 |
| ·3' RACE产物电泳检测和目的条带确定 | 第49-50页 |
| ·通用引物 PCR产物电泳检测 | 第50-51页 |
| ·特异扩增电泳检测 | 第51-52页 |
| ·鹅梨S基因3’端序列分析 | 第52-53页 |
| ·基因组序列与cDNA序列全长拼接及分析提交 | 第53-55页 |
| ·小结与讨论 | 第55-56页 |
| 4. 5' RACE及S_(13)全长cDNA克隆 | 第56-68页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56-57页 |
| ·酶、试剂、试剂盒 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·PCR引物 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·雌蕊RNA逆转录为cDNA | 第57-58页 |
| ·通过5’RACE获得S基因全长cDNA | 第58-60页 |
| ·产物检测 | 第60页 |
| ·PCR特异产物克隆及测序 | 第60页 |
| ·目的片段生物信息学分析 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-66页 |
| ·5' RACE产物电泳检测及选择回收 | 第60-61页 |
| ·通用引物PCR产物电泳检测 | 第61页 |
| ·全长S_(13)cDNA克隆的获得 | 第61-62页 |
| ·S_(13)全长cDNA分析 | 第62-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-68页 |
| 本论文的创新点与进一步研究内容 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录A 主要试剂及培养基的配制 | 第78-80页 |
| 附录B 序列登录信息 | 第80-83页 |
| 附录C 鹅梨S_(34)基因组测序图 | 第83-84页 |
| 附录D 梨S等位基因相似性比较 | 第84-85页 |
| 附录E 攻读学位期间发表的学术论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |