| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-20页 |
| 1 毛冠鹿 | 第10-12页 |
| ·亚种概述 | 第10页 |
| ·毛冠鹿特征 | 第10页 |
| ·栖息地及食性 | 第10-11页 |
| ·繁殖 | 第11页 |
| ·种群结构 | 第11页 |
| ·毛冠鹿的天敌 | 第11页 |
| ·现状和保护 | 第11-12页 |
| 2 cDNA文库 | 第12-15页 |
| ·cDNA文库的发展 | 第12-14页 |
| ·cDNA文库的应用 | 第14页 |
| ·SMART cDNA Library Construction Kit | 第14-15页 |
| 3 P1精蛋白(Protamine 1,PRM1) | 第15-18页 |
| ·精蛋白分类及性质 | 第15-16页 |
| ·精蛋白基因染色体定位及其结构 | 第16页 |
| ·精蛋白基因的进化 | 第16-17页 |
| ·精蛋白基因表达的组织特异性 | 第17页 |
| ·精蛋白与动物的生殖 | 第17页 |
| ·精蛋白的应用价值 | 第17-18页 |
| 4 麂亚科动物系统进化关系的研究现状 | 第18-20页 |
| 第二章 毛冠鹿睾丸组织cDNA基因文库的构建 | 第20-36页 |
| 前言 | 第20页 |
| 1 材料与试剂 | 第20-23页 |
| 2 主要仪器设备 | 第23页 |
| 3 实验方法 | 第23-30页 |
| ·RNA酶的灭活 | 第23-24页 |
| ·总RNA的提取 | 第24页 |
| ·RNA质量检测 | 第24页 |
| ·mRNA的纯化 | 第24-25页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| ·LD-PCR合成第二链 | 第25-26页 |
| ·Proteinase K消化 | 第26页 |
| ·Sfi I酶切 | 第26-27页 |
| ·CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA | 第27页 |
| ·cDNA与λTriplEx2载体的连接及其连接产物的体外包装 | 第27-28页 |
| ·cDNA文库的库容和重组率的测定 | 第28页 |
| ·文库的扩增和文库质量的进一步检测 | 第28-29页 |
| ·检测文库中插入子的大小 | 第29-30页 |
| ·用看家基因及睾丸组织表达基因PCR检测文库 | 第30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-34页 |
| ·RNA的完整性检测结果 | 第30-31页 |
| ·单链和双链cDNA的合成及酶切结果 | 第31-32页 |
| ·原始cDNA文库质量的鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·扩增文库质量的鉴定及插入子大小的检测结果 | 第33页 |
| ·用看家基因及睾丸组织表达基因PCR法检测文库结果 | 第33-34页 |
| 5 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 毛冠鹿P1精蛋白基因(PRM1)的克隆及其分析 | 第36-55页 |
| 前言 | 第36页 |
| 1 实验材料 | 第36页 |
| 2 主要仪器 | 第36页 |
| 3 主要试剂： | 第36-38页 |
| 4 实验方法 | 第38-44页 |
| ·cDNA文库噬菌体的环化及其测序 | 第38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR检测PRM1基因在毛冠鹿各种组织中表达情况 | 第39-40页 |
| ·P1精蛋白基因探针标记 | 第40-41页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第41页 |
| ·透析袋处理 | 第41页 |
| ·毛冠鹿基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·基因组DNA的酶切反应 | 第42页 |
| ·Southern blotting基因组DNA电泳及转膜 | 第42-43页 |
| ·Southern blotting | 第43-44页 |
| ·杂交后洗膜及其检测 | 第44页 |
| 5 结果 | 第44-53页 |
| ·P1精蛋白基因的克隆和序列分析 | 第44-49页 |
| ·P1精蛋白基因cDNA序列及由ORF编码的氨斟酸序列 | 第44-46页 |
| ·cDNA序列及氨基酸序列与GenBank中书籍序列Blast比对 | 第46-48页 |
| ·毛冠鹿PRM1基因cDNA序列限制酶谱分析 | 第48-49页 |
| ·毛冠鹿P1精蛋白二级结构及其三级结构预测 | 第49页 |
| ·P1精蛋白基因在毛冠鹿各种组织中表达情况 | 第49-51页 |
| ·PRM1基因标记探针效率 | 第51页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第52-53页 |
| ·PRM1 Southern blotting结果 | 第53页 |
| 6.讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 毛冠鹿、黑麂、赤麂、小麂和獐的PRM1基因的克隆及系统进化分析 | 第55-66页 |
| 前言 | 第55-56页 |
| 1 实验材料 | 第56页 |
| 2 主要仪器 | 第56页 |
| 3 主要试剂 | 第56页 |
| 4 实验方法 | 第56-58页 |
| ·DNA的提取 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56-57页 |
| ·PCR反应及割胶回收产物 | 第57页 |
| ·连接反应 | 第57-58页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第58页 |
| ·转化 | 第58页 |
| ·阳性克隆的鉴定及测序 | 第58页 |
| 5 实验结果 | 第58-64页 |
| ·PCR扩增毛冠鹿、黑麂、赤麂、小麂和獐的PRM1基因结果 | 第58-59页 |
| ·PRM1基因测序结果 | 第59-61页 |
| ·序列分析及其系统进化分析 | 第61-64页 |
| 6 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
