| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 概述 | 第13-20页 |
| 1 精子结合外源DNA 及内化转运的分子机制 | 第13-14页 |
| 2 外源DNA 在精子细胞内的存在与降解 | 第14-15页 |
| 3 精子载体法制备转基因动物策略 | 第15-18页 |
| ·体外精子介导法 | 第16-18页 |
| ·精子与外源DNA 的共孵育 | 第16-17页 |
| ·脂质体包裹DNA 转染精子 | 第17页 |
| ·电穿孔法 | 第17页 |
| ·显微注射受精法(ICSI) | 第17页 |
| ·限制性内切酶介导法(REMI) | 第17-18页 |
| ·单克隆抗体C 介导法 | 第18页 |
| ·体内精子介导法 | 第18页 |
| 4 结语 | 第18-20页 |
| 研究内容 | 第20-46页 |
| 1 外源DNA 转染小鼠精子的研究 | 第20-28页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·试验试剂 | 第20页 |
| ·试验仪器 | 第20-21页 |
| ·试验方法 | 第21-24页 |
| ·外源DNA pEGFP-N1 的准备 | 第21-23页 |
| ·精子转染试验方法 | 第23页 |
| ·转染精子的免疫组化检查方法 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-26页 |
| ·pEGFP-N1 质粒鉴定及纯化 | 第24-25页 |
| ·转染精子的免疫组化检测 | 第25页 |
| ·孵育时间及DNA 浓度对精子转染的影响 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 2 精子介导法制备转基因小鼠的试验研究 | 第28-35页 |
| ·试验材料 | 第28-29页 |
| ·药品试剂 | 第29页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·外源DNA | 第29页 |
| ·试验主要仪器 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-30页 |
| ·卵母细胞的采集和体外受精 | 第29-30页 |
| ·GFP 表达的检测 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-32页 |
| ·体外精子获能的评价 | 第30-31页 |
| ·体外受精及体外培养结果 | 第31-32页 |
| ·早期胚胎中绿色荧光蛋白表达结果 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·利用考马斯亮蓝染色技术评价体外受精液对精子获能的效果 | 第32页 |
| ·体外受精及体外培养系统的建立 | 第32-33页 |
| ·精子载体法转染GFP 在早期胚胎中的表达 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 3 乙肝病毒结合蛋白表达载体的构建 | 第35-46页 |
| ·试验材料 | 第35-36页 |
| ·试验试剂 | 第35页 |
| ·试验仪器 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·真核表达载体3’端PolyA 的PCR 扩增 | 第36页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第36-37页 |
| ·pMD18-TPolyA 连接及酶切鉴定 | 第37页 |
| ·酶切质粒pTieph及片断的回收 | 第37-38页 |
| ·pTHBVbp 质粒的体外重组 | 第38-39页 |
| ·pTHBVbp 质粒酶切鉴定 | 第39页 |
| ·试验结果及分析 | 第39-44页 |
| ·PolyA 的PCR 扩增及pMD18-TPolyA 质粒酶切、测序结果 | 第39-42页 |
| ·pTieph 质粒的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·体外重组质粒pTHBVbp 的酶切鉴定及测序结果 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 个人简介 | 第57-58页 |
| 导师组意见 | 第58-59页 |
| 学位论文独创性声明 | 第59页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第59页 |
