D-海因酶的体外分子定向进化和定点突变
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 项目研究意义 | 第10-12页 |
| 2 D-海因酶简介 | 第12-15页 |
| ·酶的晶体结构 | 第13页 |
| ·酶的催化机制 | 第13-15页 |
| 3 酶的体外定向进化研究进展 | 第15-20页 |
| ·酶分子指定性进化的方法 | 第15-18页 |
| ·突变体分子文库的筛选策略 | 第18-20页 |
| 4 D-海因酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 第二章 以易错PCR研究海因酶的分子定向进化 | 第21-33页 |
| 一 D-海因酶突变体分子文库的构建 | 第22-27页 |
| 1 材料 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-24页 |
| 3 易错PCR条件的优化 | 第24-27页 |
| 二 D-海因酶突变体分子文库的筛选 | 第27-30页 |
| 1 材料 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 三 D-海因酶分子定向进化实验结果 | 第30-33页 |
| 1 酶的基因序列 | 第30页 |
| 2 酶的活性比较 | 第30-31页 |
| 3 进化酶和重组酶的产量比较 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 D-海因酶的定点突变研究 | 第33-39页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·菌株、质粒 | 第33页 |
| ·化学试剂 | 第33页 |
| ·主要的仪器设备 | 第33页 |
| ·寡聚核苷酸 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-36页 |
| ·扩增含有相应点突变的D-海因酶基因片段 | 第34-35页 |
| ·扩增含有相应点突变的D-海因酶全长基因序列 | 第35页 |
| ·重组质粒的构建 | 第35页 |
| ·定点突变后的D-海因酶活性测定 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第36页 |
| ·定点突变后的D-海因酶活性 | 第36-37页 |
| ·突变酶HDT(H409T)的纯化分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 附录 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 承诺书 | 第44页 |
