| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-19页 |
| 1．1 PCR技术介绍 | 第8-11页 |
| 1．1．1 PCR的原理 | 第8页 |
| 1．1．2 PCR扩增实验的条件 | 第8-9页 |
| 1．1．3 PCR反应参数 | 第9-10页 |
| 1．1．4 Pfu DNA聚合酶的使用条件 | 第10-11页 |
| 1．2 耐热性DNA聚合酶的功能特性 | 第11-12页 |
| 1．3 Taq DNA聚合酶的基本结构和性质 | 第12-14页 |
| 1．4 Pfu DNA聚合酶 | 第14-15页 |
| 1．5 常用的几种耐热性DNA聚合酶的比较 | 第15-17页 |
| 1．6 该课题的研究现状和选题意义 | 第17-19页 |
| 第二章 DNA聚合酶检测方法的建立 | 第19-24页 |
| 2．1 材料 | 第19-20页 |
| 2．1．1 蛋白电泳(SDS-PAGE)实验用溶液 | 第19页 |
| 2．1．2 蛋白质浓度测定(Bredford法)溶液 | 第19页 |
| 2．1．3 琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第19-20页 |
| 2．1．4 实验设备 | 第20页 |
| 2．2 检测方法 | 第20-24页 |
| 2．2．1 蛋白质电泳(SDS-PAGE)检测 | 第20-21页 |
| 2．2．2 蛋白质浓度测定-Bradfoul法 | 第21-22页 |
| 2．2．3 DNA聚合酶活性检测 | 第22-23页 |
| 2．2．4 蛋白质纯度分析 | 第23页 |
| 2．2．5 菌体密度的测定 | 第23-24页 |
| 第三章 重组TAQ DNA聚合酶的培养和提纯 | 第24-34页 |
| 3．1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 3．1．1 材料 | 第24-25页 |
| 3．1．2 培养条件 | 第25页 |
| 3．1．3 菌种的保存 | 第25页 |
| 3．1．4 Taq DNA聚合酶的提纯 | 第25-27页 |
| 3．2 结果与讨论 | 第27-33页 |
| 3．2．1 硫酸氨分级沉淀 | 第27-28页 |
| 3．2．2 粗酶的活性检测 | 第28-29页 |
| 3．2．3 蛋白质浓度的测定 | 第29页 |
| 3．2．4 培养条件的优化 | 第29-33页 |
| 3．3 小结 | 第33-34页 |
| 第四章 重组PFU DNA聚合酶的培养及提取 | 第34-44页 |
| 4．1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 4．1．1 菌种 | 第34页 |
| 4．1．2 培养基 | 第34页 |
| 4．1．3 试剂 | 第34-35页 |
| 4．1．4 实验设备 | 第35页 |
| 4．1．5 重组菌的活化 | 第35页 |
| 4．1．6 细菌的培养(发酵) | 第35-36页 |
| 4．1．7 Pfu酶的提取 | 第36页 |
| 4．1．8 IPTG作诱导剂的诱导条件优化 | 第36-37页 |
| 4．1．9 乳糖作诱导剂的研究 | 第37页 |
| 4．2 结果与讨论 | 第37-42页 |
| 4．2．1 Pfu酶重组菌及其培养 | 第37页 |
| 4．2．2 Pfu酶的提取及检测 | 第37-38页 |
| 4．2．3 IPTG作诱导剂的诱导条件优化 | 第38-40页 |
| 4．2．4 乳糖作诱导剂的诱导条件优化 | 第40-42页 |
| 4．2．5 Pfu粗酶的活性检测 | 第42页 |
| 4．3 小结 | 第42-44页 |
| 第五章 PFU DNA聚合酶的柱层析纯化研究 | 第44-56页 |
| 5．1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 5．1．1 试剂 | 第44页 |
| 5．1．2 实验设备 | 第44-45页 |
| 5．1．3 等电聚焦电泳 | 第45-46页 |
| 5．1．4 离子交换层析 | 第46-48页 |
| 5．1．5 凝胶过滤 | 第48-49页 |
| 5．2 结果与讨论 | 第49-55页 |
| 5．2．1 等电聚焦电泳测pI | 第49-50页 |
| 5．2．2 离子交换层析 | 第50-53页 |
| 5．2．3 凝胶过滤 | 第53-55页 |
| 5．3 小结 | 第55-56页 |
| 第六章 PFU DNA聚合酶的制备及检测 | 第56-65页 |
| 6．1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 6．1．1 菌种和培养基 | 第56页 |
| 6．1．2 分离树脂和溶液 | 第56-57页 |
| 6．1．3 实验设备 | 第57页 |
| 6．1．4 重组菌的培养 | 第57页 |
| 6．1．5 Pfu酶的粗提 | 第57-58页 |
| 6．1．6 Pfu酶的柱层析纯化 | 第58页 |
| 6．1．7 蛋白质浓度及纯度的确定 | 第58页 |
| 6．1．8 用PCR检测纯化Pfu酶的活性 | 第58页 |
| 6．2 结果与讨论 | 第58-64页 |
| 6．2．1 Pfu酶的纯化 | 第58-60页 |
| 6．2．2 蛋白质浓度的测定 | 第60-62页 |
| 6．2．3 纯化Pfu DNA聚合酶的活性检测 | 第62-63页 |
| 6．2．4 纯化过程及产品 | 第63-64页 |
| 6．3 小结 | 第64-65页 |
| 第七章 工作总结与建议 | 第65-67页 |
| 7．1 工作总结 | 第65-66页 |
| 7．1．1 Taq DNA聚合酶的提取与纯化 | 第65页 |
| 7．1．2 Pfu DNA聚合酶的提取与纯化 | 第65-66页 |
| 7．2 建议 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70页 |