| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·阿片肽的生理作用 | 第8-9页 |
| ·痛觉调制 | 第8页 |
| ·阿片耐受与阿片成瘾 | 第8页 |
| ·内分泌和免疫功能调节 | 第8-9页 |
| ·阿片肽分类 | 第9-10页 |
| ·外源阿片肽 | 第9页 |
| ·内源阿片肽 | 第9-10页 |
| ·内源阿片肽的来源 | 第9-10页 |
| ·获得生物活性肽的途径 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母在外源蛋白生产中的优势 | 第11-12页 |
| ·影响毕赤酵母基因工程菌表达外源蛋白的因素 | 第12-13页 |
| ·立题背景和意义 | 第13页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 毕赤酵母基因工程菌表达阿片肽生长条件的优化 | 第14-25页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·材料与方法 | 第14-16页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·培养方法 | 第16页 |
| ·分析方法 | 第16页 |
| ·实验结果与分析 | 第16-23页 |
| ·碳源对菌体生长的影响 | 第16-17页 |
| ·添加酵母膏对菌体生长的影响 | 第17-18页 |
| ·YNB用量对菌体生长的影响 | 第18页 |
| ·初始pH 对菌体生长的影响 | 第18-20页 |
| ·摇床转速对菌体生长的影响 | 第20页 |
| ·温度对菌体生长的影响 | 第20-21页 |
| ·工程菌生长条件的正交优化 | 第21-23页 |
| ·最优条件下的菌体生长 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-25页 |
| 第三章 毕赤酵母基因工程菌表达产物生理活性检测 | 第25-37页 |
| ·前言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-34页 |
| ·毕赤酵母细胞破碎方法和条件的研究 | 第27-29页 |
| ·三种破碎方法的结果比较 | 第27页 |
| ·三种破碎方法对产物阿片肽的影响 | 第27-28页 |
| ·毕赤酵母细胞破碎最优pH 的确定 | 第28-29页 |
| ·凝胶柱层析分离毕赤酵母胞内表达产物 | 第29页 |
| ·表达产物活性检测 | 第29-34页 |
| ·离体豚鼠回肠检测法的实验方法 | 第30页 |
| ·离体豚鼠回肠实验结果 | 第30-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第四章 毕赤酵母表达阿片肽片段定量方法的初探 | 第37-41页 |
| ·前言 | 第37页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·实验原理 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-40页 |
| ·衍生化反应时间的确定 | 第38-39页 |
| ·荧光物质稳定性研究 | 第39页 |
| ·衍生化反应重复性考察 | 第39-40页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第五章 毕赤酵母基因工程菌表达条件的优化 | 第41-50页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·培养方法 | 第42页 |
| ·细胞破碎方法 | 第42页 |
| ·分析方法 | 第42-43页 |
| ·实验结果与分析 | 第43-49页 |
| ·诱导表达最优时间的确定 | 第43页 |
| ·菌体起始诱导密度对目的蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| ·不同起始pH 对目的蛋白表达水平的影响 | 第44页 |
| ·不同氮源对目的蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| ·甲醇浓度对目的蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| ·甲醇流加方式对表达量的影响 | 第46-47页 |
| ·诱导温度对表达量的影响 | 第47页 |
| ·在诱导后阶段添加适量甘油对表达的影响 | 第47-48页 |
| ·优化结果考察 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 结论与展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 硕士期间发表文章 | 第59页 |