| 摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-17页 |
| 第一章 研究背景与立题依据 | 第17-52页 |
| 1．1 研究背景 | 第17-41页 |
| 1．1．1 适冷微生物研究进展 | 第17-26页 |
| 1．1．1．1 适冷微生物的定义 | 第17-18页 |
| 1．1．1．2 适冷微生物的多样性及分布 | 第18-20页 |
| 1．1．1．3 适冷微生物的适冷特征 | 第20-24页 |
| 1．1．1．4 适冷微生物的应用 | 第24-26页 |
| 1．1．2 适冷酶研究进展 | 第26-41页 |
| 1．1．2．1 适冷酶简介 | 第26-27页 |
| 1．1．2．2 适冷酶的适冷催化特征 | 第27-31页 |
| 1．1．2．3 适冷酶的结构特征 | 第31-35页 |
| 1．1．2．4 适冷酶的基因克隆、表达和改造 | 第35-37页 |
| 1．1．2．5 适冷酶的应用 | 第37-41页 |
| 1．2 立题依据 | 第41-52页 |
| 1．2．1 蛋白酶及其应用 | 第41-43页 |
| 1．2．1．1 蛋白酶的分类 | 第42页 |
| 1．2．1．2 蛋白酶的应用 | 第42-43页 |
| 1．2．2 适冷蛋白酶及其研究进展 | 第43-47页 |
| 1．2．2．1 适冷蛋白酶的来源 | 第43-44页 |
| 1．2．2．2 适冷蛋白酶的特征 | 第44-46页 |
| 1．2．2．3 适冷蛋白酶的应用 | 第46-47页 |
| 1．2．3 我国适冷菌、适冷酶和海洋微生物的研究状况 | 第47-48页 |
| 1．2．4 本论文的研究基础和内容 | 第48-52页 |
| 1．2．4．1 本论文的研究基础 | 第48-50页 |
| 1．2．4．2 本论文的研究内容 | 第50-52页 |
| 第二章 深海适冷菌株 SM9913的种属鉴定 | 第52-63页 |
| 2．1 材料和方法 | 第53-55页 |
| 2．2 结果与分析 | 第55-60页 |
| 2．2．1 深海适冷菌P．sp． SM9913的16SrDNA的克隆 | 第55-57页 |
| 2．2．1．1 深海适冷菌P．sp．SM9913基因组 DNA的提取 | 第55页 |
| 2．2．1．2 深海适冷菌P．sp． SM9913的16SrDNA的克隆 | 第55-56页 |
| 2．2．1．3 PmT-16SrDNA重组质粒的构建 | 第56页 |
| 2．2．1．4 重组质粒 PmT-16SrDNA的转化及重组子的筛选和鉴定 | 第56-57页 |
| 2．2．2 深海适冷菌P． sp． SM9913的16SrDNA的序列测定和同源性分析 | 第57-58页 |
| 2．2．2．1 深海适冷菌P．sp．SM9913的16SrDNA的序列测定 | 第57页 |
| 2．2．2．2 深海适冷菌P．sp． SM9913的16SrDNA的同源性分析 | 第57-58页 |
| 2．2．3 深海适冷菌P．sp． SM9913的唯一碳源实验 | 第58-60页 |
| 2．2．4 深海适冷菌P． sp． SM9913菌株的系统进化分析 | 第60页 |
| 2．3 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 深海适冷蛋白酶 MCP-01的基因克隆和结构分析 | 第63-85页 |
| 3．1 材料和方法 | 第64-65页 |
| 3．2 结果与分析 | 第65-82页 |
| 3．2．1 深海适冷蛋白酶 MCP-01的活性中心保守片断M4的克隆和测序 | 第65-68页 |
| 3．2．1．1 引物设计 | 第65-66页 |
| 3．2．1．2 深海适冷菌 P． sp．SM9913基因组 DNA的提取 | 第66页 |
| 3．2．1．3 蛋白酶 MCP-01的活性中心保守片断M4的克隆 | 第66-67页 |
| 3．2．1．4 PmT-M4重组质粒的构建 | 第67页 |
| 3．2．1．5 重组质粒 PmT-M4的转化及重组子的筛选和鉴定 | 第67页 |
| 3．2．1．6 DNA片断M4的序列测定和同源性分析 | 第67-68页 |
| 3．2．2 蛋白酶 MCP-01的基因克隆 | 第68-79页 |
| 3．2．2．1 深海适冷菌P．sp． SM9913部分基因组文库的建立 | 第68-69页 |
| 3．2．2．2 利用菌落原位杂交寻找带有蛋白酶MCP-01基因的阳性菌落 | 第69-70页 |
| 3．2．2．3 DNA片断MCP的测序和分析 | 第70-72页 |
| 3．2．2．4 通过TAIL PCR克隆蛋白酶MCP-01N端部分基因序列 | 第72-76页 |
| 3．2．2．5 蛋白酶MCP-01的基因序列和同源性分析 | 第76-79页 |
| 3．2．2．6 基因MCP-01的启动子分析 | 第79页 |
| 3．2．3 蛋白酶MCP-01的结构分析 | 第79-82页 |
| 3．2．3．1 蛋白酶MCP-01的一级结构的推导和分析 | 第79-81页 |
| 3．2．3．2 蛋白酶MCP-01的高级结构分析 | 第81-82页 |
| 3．3 讨论 | 第82-85页 |
| 第四章 深海适冷蛋白酶MCP-01的自溶机制 | 第85-105页 |
| 4．1 材料与方法 | 第86-88页 |
| 4．2 结果与分析 | 第88-102页 |
| 4．2．1 适冷蛋白酶MCP-01的纯化 | 第88页 |
| 4．2．2 浓度对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第88-93页 |
| 4．2．2．1 不同浓度的适冷蛋白酶MCP-01的制备 | 第88-90页 |
| 4．2．2．2 不同浓度的适冷蛋白酶MCP-01在30下的自溶研究 | 第90-93页 |
| 4．2．3 不同pH下温度对适冷蛋白酶MCP-01自溶和热稳定性的影响 | 第93-98页 |
| 4．2．3．1 温度对在pH6．5，50mmol/L Tris缓冲液中蛋白酶MCP-01自溶和热稳定性的影响 | 第93-94页 |
| 4．2．3．2 温度对在pH7．5，50mmol/L Tris缓冲液中蛋白酶MCP-01自溶和热稳定性的影响 | 第94-96页 |
| 4．2．3．3 温度对在pH8．5，50mmol/L Tris缓冲液中蛋白酶MCP-01自溶和热稳定性的影响 | 第96-98页 |
| 4．2．4 pH对适冷蛋白酶 MCP-01自溶的影响 | 第98-102页 |
| 4．2．4．1 在50mmol/L Tris缓冲液中pH对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第98-99页 |
| 4．2．4．2 在50mmol/L硼酸缓冲液中pH对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第99-102页 |
| 4．3 讨论 | 第102-105页 |
| 第五章 糖对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第105-120页 |
| 5．1 材料与方法 | 第105-106页 |
| 5．2 结果与分析 | 第106-117页 |
| 5．2．1 海藻糖对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第106-113页 |
| 5．2．1．1 海藻糖对不同浓度适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第106-109页 |
| 5．2．1．2 海藻糖对不同pH的适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第109-113页 |
| 5．2．2 蔗糖对适冷蛋白酶 MCP-01自溶的影响 | 第113-114页 |
| 5．2．3 三种单糖对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响 | 第114-117页 |
| 5．3 讨论 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-136页 |
| 本论文的创新性结果 | 第136-137页 |
| 在读博士期间发表的论文 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第139页 |
