| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-29页 |
| ·烟草概述 | 第16-17页 |
| ·烟草属的分类和起源 | 第16页 |
| ·烟草基因组计划研究概述 | 第16-17页 |
| ·CDPK 的基本特性及作用 | 第17-25页 |
| ·CDPK 的结构 | 第17-18页 |
| ·CDPK 亚细胞定位和组织表达 | 第18页 |
| ·CDPK 的活性调控 | 第18-19页 |
| ·CDPK 在植物信号转导中的作用 | 第19-22页 |
| ·CDPK 的底物及抑制剂 | 第22-25页 |
| ·酵母双杂交在 CDPK 功能分析中的应用 | 第25页 |
| ·本实验的目的意义、主要内容及技术路线 | 第25-29页 |
| ·目的和意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 绒毛状烟草 CDPK 基因家族分析 | 第29-39页 |
| ·材料和方法 | 第29-31页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·数据来源 | 第29页 |
| ·基因结构分析 | 第29页 |
| ·蛋白结构域分析 | 第29页 |
| ·基因 GC 含量计算 | 第29-30页 |
| ·序列比对与系统进化树分析 | 第30页 |
| ·主坐标分析 | 第30页 |
| ·基因表达分析 | 第30-31页 |
| ·结果分析 | 第31-37页 |
| ·绒毛状烟草 CDPK 基因的结构特征 | 第31-32页 |
| ·绒毛状烟草 CDPK 的序列特征和蛋白结构域 | 第32-33页 |
| ·绒毛状烟草 CDPK 基因的 GC 含量 | 第33-34页 |
| ·系统进化树分析 | 第34-36页 |
| ·主坐标分析 | 第36页 |
| ·绒毛状烟草 CDPK 基因的表达分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 诱饵载体的构建及其毒性、自我激活性分析 | 第39-49页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·试验试剂及培养基 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-45页 |
| ·总 RNA 提取 | 第39-40页 |
| ·cDNA 的合成 | 第40页 |
| ·PCR 反应 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物回收 | 第41页 |
| ·PCR 产物的克隆及测序 | 第41-42页 |
| ·pMD18-T 重组质粒和 pGBKT7 酶切、回收、连接及转化 | 第42-43页 |
| ·诱饵质粒的提取及 PCR 检测 | 第43-44页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·诱饵载体的转化 | 第44-45页 |
| ·诱饵载体毒性及自我激活性检测 | 第45页 |
| ·结果分析 | 第45-47页 |
| ·烟草 NtCDPK12q 和 NtCDPK12j 的 PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第46-47页 |
| ·诱饵载体的转化及自我激活和毒性鉴定 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 烟草酵母双杂交 cDNA 文库构建及评价 | 第49-56页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·试验试剂及培养基 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-53页 |
| ·RNA 的提取及检测 | 第49-50页 |
| ·第一链 cDNA 合成 | 第50页 |
| ·LD-PCR 扩增 ds cDNA | 第50-51页 |
| ·Y187 酵母感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·制备酵母双杂交 cDNA 文库 | 第51页 |
| ·文库滴定度的检测 | 第51-52页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第52页 |
| ·文库插入片段的检测 | 第52-53页 |
| ·结果分析 | 第53-55页 |
| ·总 RNA 提取及 ds cDNA 合成 | 第53-54页 |
| ·文库的转化效率及文库滴定度的检测 | 第54页 |
| ·文库插入片段的检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 NtCDPK12 作用底物筛选及分析 | 第56-64页 |
| ·试验试剂及培养基 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-58页 |
| ·酵母双杂交互作子的筛选 | 第56-57页 |
| ·酵母质粒的提取及转化 | 第57页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第57页 |
| ·定量分析 | 第57-58页 |
| ·试验结果 | 第58-61页 |
| ·NtCDPK12 作用底物的筛选 | 第58页 |
| ·测序结果及分析 | 第58-59页 |
| ·定量分析 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第六章 结论 | 第64-65页 |
| ·结论 | 第64页 |
| ·创新点 | 第64页 |
| ·工作展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |