| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-87页 |
| 第一章 动物乳腺细胞培养研究进展 | 第14-26页 |
| ·动物细胞培养研究进展 | 第14-18页 |
| ·动物细胞培养发展简史 | 第14-15页 |
| ·细胞系的生长特点 | 第15-16页 |
| ·细胞系(株)的建立与鉴定 | 第16-18页 |
| ·乳腺细胞培养研究进展 | 第18-26页 |
| ·乳腺细胞培养方法研究进展 | 第18-19页 |
| ·乳腺上皮细胞的类型及相互关系 | 第19-20页 |
| ·建立乳腺细胞系的研究 | 第20-21页 |
| ·牛乳腺上皮细胞系研究进展 | 第21-22页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞培养研究进展 | 第22-26页 |
| 第二章 转基因动物乳腺生物反应器研究进展 | 第26-74页 |
| ·转基因动物的研究 | 第26-29页 |
| ·啮齿动物转基因生物反应器模型 | 第27页 |
| ·反刍动物转基因生物反应器 | 第27-28页 |
| ·转基因动物制药的优点 | 第28-29页 |
| ·乳腺系统基因表达调控的分子机制 | 第29-35页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的原理 | 第35-36页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的建立 | 第36-51页 |
| ·构建表达载体 | 第36-43页 |
| ·构建转基因动物 | 第43页 |
| ·影响外源基因表达效率的因素 | 第43-47页 |
| ·提高外源基因表达效率的策略 | 第47-51页 |
| ·基因转移技术 | 第51-58页 |
| ·显微注射法 | 第51-52页 |
| ·配子介导法 | 第52-54页 |
| ·转座子法 | 第54页 |
| ·逆转录病毒浸染技术 | 第54-55页 |
| ·胚胎干细胞转导法 | 第55-56页 |
| ·PGCs 技术 | 第56页 |
| ·核移植介导法 | 第56-58页 |
| ·其它新技术的思考 | 第58页 |
| ·体细胞基因打靶(同源重组技术)制备动物乳腺生物反应器 | 第58-62页 |
| ·体细胞基因打靶的技术优势 | 第58-59页 |
| ·体细胞基因打靶的策略 | 第59-62页 |
| ·提高体细胞基因打靶的效率 | 第62页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的鉴定 | 第62-63页 |
| ·DNA 水平的检测 | 第62页 |
| ·RNA 水平的检测 | 第62页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白生物活性的检测 | 第63页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的产业化动态 | 第63-65页 |
| ·转基因生物反应器存在的问题、发展前景及我国研究现状 | 第65-69页 |
| ·人乳铁蛋白基因表达载体构建及细胞表达的研究 | 第69-74页 |
| 第三章 哺乳动物细胞转染 DNA | 第74-87页 |
| ·磷酸钙和 DEAE-葡聚糖介导的转染 | 第74-77页 |
| ·电穿孔和电融合 | 第77-82页 |
| ·利用阳离子型脂质体将 DNA 导入哺乳动物细胞 | 第82-87页 |
| 实验研究 | 第87-167页 |
| 前言 | 第87-88页 |
| 第四章 山羊乳腺上皮细胞体外培养及形态研究 | 第88-114页 |
| ·材料和方法 | 第88-91页 |
| ·材料 | 第88-89页 |
| ·方法 | 第89-91页 |
| ·结果 | 第91-92页 |
| ·乳腺上皮细胞的生长特性 | 第91页 |
| ·乳腺上皮细胞的类型 | 第91-92页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的超微结构 | 第92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·乳腺上皮细胞的生长特性 | 第92-93页 |
| ·乳腺上皮细胞的类型 | 第93页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的超微结构 | 第93-94页 |
| ·结论 | 第94-95页 |
| 图版 | 第95-114页 |
| 第五章 山羊乳腺上皮细胞的鉴定 | 第114-122页 |
| ·材料 | 第114-115页 |
| ·方法 | 第115-117页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞染色体分析 | 第115-116页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞表达酪蛋白的检测 | 第116-117页 |
| ·结果 | 第117-119页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞染色体分析结果 | 第117-118页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-121页 |
| ·结论 | 第121-122页 |
| 第六章 山羊β-乳球蛋白基因5′调控成分克隆及序列分析 | 第122-130页 |
| ·材料和方法 | 第123-128页 |
| ·材料 | 第123-124页 |
| ·方法 | 第124-128页 |
| ·引物设计 | 第124-125页 |
| ·山羊基因组 DNA 的提取 | 第125页 |
| ·山羊 BLG(β-lactoglobulin)基因5′调控区PCR 扩增 | 第125页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第125页 |
| ·目的片段的克隆、鉴定和序列测定 | 第125-128页 |
| ·结果与分析 | 第128-129页 |
| ·山羊基因组 DNA 的完整性 | 第128页 |
| ·山羊 BLG 基因5′调控区的PCR 扩增 | 第128页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第128-129页 |
| ·序列分析结果 | 第129页 |
| ·讨论 | 第129-130页 |
| 第七章 人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建 | 第130-140页 |
| ·材料和方法 | 第130-136页 |
| ·材料 | 第130-131页 |
| ·质粒、菌种和细胞 | 第130-131页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第131页 |
| ·方法 | 第131-136页 |
| ·人乳铁蛋白cDNA 的改造 | 第131-132页 |
| ·人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体的构建 | 第132-136页 |
| ·结果 | 第136-138页 |
| ·EGFP 和IRES 的PCR扩增后电泳鉴定 | 第136页 |
| ·IRES 和 EGFP 的亚克隆和酶切鉴定结果 | 第136页 |
| ·乳腺特异性表达载体构建结果 | 第136-138页 |
| ·讨论 | 第138-140页 |
| 第八章 人乳铁蛋白基因表达载体导入山羊乳腺上皮细胞的研究 | 第140-146页 |
| ·材料 | 第140-141页 |
| ·细胞 | 第140页 |
| ·质粒 | 第140页 |
| ·试剂 | 第140-141页 |
| ·方法 | 第141-142页 |
| ·G418 对山羊乳腺上皮细胞最小致死量测定 | 第141页 |
| ·电穿孔转化法将人乳铁蛋白基因表达载体导入山羊乳腺上皮细胞 | 第141页 |
| ·脂质体转染法将人乳铁蛋白基因表达载体导入山羊乳腺上皮细胞 | 第141-142页 |
| ·转染细胞的筛选 | 第142页 |
| ·转染细胞的检测 | 第142页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第142页 |
| ·PCR 检测 | 第142页 |
| ·阳性细胞的体外传代培养 | 第142页 |
| ·结果 | 第142-145页 |
| ·G418 对山羊乳腺上皮细胞最小致死量的测定结果 | 第142-143页 |
| ·G418 抗性山羊乳腺上皮细胞的阳性克隆筛选 | 第143页 |
| ·转染细胞的检测结果 | 第143页 |
| ·荧光显微镜观察结果 | 第143页 |
| ·PCR 检测结果 | 第143页 |
| ·阳性细胞的体外传代培养 | 第143-145页 |
| ·讨论 | 第145页 |
| ·结论 | 第145-146页 |
| 第九章 转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞诱导产物的检测 | 第146-154页 |
| ·材料和方法 | 第146-148页 |
| ·材料 | 第146-147页 |
| ·方法 | 第147-148页 |
| ·细胞诱导表达及样品处理 | 第147页 |
| ·诱导产物的检测 | 第147-148页 |
| ·结果 | 第148-149页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第148页 |
| ·Western blot 结果 | 第148-149页 |
| ·讨论 | 第149-152页 |
| ·结论 | 第152-154页 |
| 第十章 转人乳铁蛋白基因山羊克隆胚的发育 | 第154-167页 |
| ·材料和方法 | 第156-159页 |
| ·试剂和仪器 | 第156页 |
| ·基础培养液及主要试剂 | 第156页 |
| ·仪器设备 | 第156页 |
| ·卵母细胞的体外成熟和去核 | 第156-157页 |
| ·卵丘卵母细胞复合体(COCs)的回收 | 第156-157页 |
| ·COCs的体外成熟 | 第157页 |
| ·成熟卵母细胞的去核 | 第157页 |
| ·供体细胞的准备 | 第157页 |
| ·核移植、电融合及克隆胚的激活 | 第157-158页 |
| ·克隆胚的体外培养 | 第158页 |
| ·胚胎细胞计数 | 第158页 |
| ·克隆胚外源基因的检测 | 第158页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第158页 |
| ·PCR检测 | 第158页 |
| ·数据分析 | 第158-159页 |
| ·结果 | 第159-164页 |
| ·不同构建方法对克隆胚的构建效率 | 第159页 |
| ·转基因细胞的冻-融对克隆胚发育的影响 | 第159页 |
| ·克隆胚在SOFaa培养液中的发育 | 第159-160页 |
| ·克隆胚在CR1aa培养液中的发育 | 第160页 |
| ·克隆胚在mCR1aa培养液中的发育 | 第160-161页 |
| ·克隆胚在不同培养液中的发育 | 第161页 |
| ·转基因细胞与正常细胞克隆胚发育的比较 | 第161-162页 |
| ·转基因细胞的传代次数对构建克隆胚的影响 | 第162页 |
| ·EGFP 在克隆胚中的表达 | 第162-163页 |
| ·克隆胚外源基因的PCR 检测结果 | 第163-164页 |
| ·讨论 | 第164-166页 |
| ·结论 | 第166-167页 |
| 全文结论 | 第167-168页 |
| 参考文献 | 第168-185页 |
| 致谢 | 第185-186页 |
| 个人简介 | 第186-187页 |
