| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-32页 |
| ·蓝藻中的光合作用 | 第11-15页 |
| ·光合作用 | 第11页 |
| ·光反应 | 第11页 |
| ·碳固定反应 | 第11-13页 |
| ·果糖-1,6-二磷酸醛缩酶在碳固定反应中的地位 | 第13页 |
| ·蓝藻中的果糖1,6-二磷酸醛缩酶 | 第13-14页 |
| ·蓝藻中光合基因对光合作用的调控 | 第14页 |
| ·蓝藻Calvin 循环酶的转基因研究 | 第14-15页 |
| ·卡尔文循环的调控 | 第15-21页 |
| ·环境因子对卡尔文循环酶的调节 | 第15-16页 |
| ·pH及Mg~(2+)浓度对卡尔文循环酶的调节 | 第15-16页 |
| ·光相关的共价修饰在对卡尔文循环酶的重要调节功能 | 第16页 |
| ·卡尔文循环酶的基因工程调节 | 第16-21页 |
| ·Calvin 循环酶的反义植物研究概况 | 第16-17页 |
| ·酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco) | 第17页 |
| ·景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(SBPase) | 第17-18页 |
| ·质体果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA) | 第18-19页 |
| ·转酮酶(TKL) | 第19-20页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),果糖-1,6-二磷酸酶(FB Pase)和磷酸核酮糖激酶(PRK) | 第20页 |
| ·反义植物分析结果将碳固定研究的注意力转向FBA | 第20-21页 |
| ·植物果糖1,6-二磷酸醛缩酶的分子生物学研究 | 第21-25页 |
| ·果糖1,6-二磷酸醛缩酶的类别与结构 | 第21-22页 |
| ·果糖1,6-二磷酸醛缩酶的分布 | 第22页 |
| ·植物中的 FBA 的纯化及其类型 | 第22页 |
| ·植物 FBA 的保守区域 | 第22-23页 |
| ·FBA 催化的反应 | 第23页 |
| ·I 类FBA 反应的分子机理 | 第23页 |
| ·植物 FBA 的基因工程研究 | 第23-25页 |
| ·植物及部分藻类胞质及叶绿体型FBA cDNA 及基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·水稻胞质 FBA 基因的克隆及其表达 | 第24-25页 |
| ·植物 FBA 基因的反义转基因植物研究 | 第25页 |
| ·植物 FBA 基因在其他植物中的过表达研究 | 第25页 |
| ·蓝藻基因工程 | 第25-31页 |
| ·概述 | 第25-26页 |
| ·可用于蓝藻的质粒载体 | 第26-27页 |
| ·可以在蓝藻中自我复制的质粒 | 第27页 |
| ·整合载体和转座子 | 第27页 |
| ·外源基因导入蓝藻的方法 | 第27-28页 |
| ·遗传转化 | 第27-28页 |
| ·接合转移 | 第28页 |
| ·国内外用于应用的蓝藻基因工程进展 | 第28-30页 |
| ·用于治理环境 | 第28-29页 |
| ·用于制备基因工程药物 | 第29-30页 |
| ·选择蓝藻作为靶酶基因表达宿主研究光合作用的原因 | 第30-31页 |
| ·本论文的目的和意义 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-47页 |
| ·材料 | 第32-35页 |
| ·质粒、菌株与藻株 | 第32-33页 |
| ·工具酶与试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-47页 |
| ·蓝藻的培养、纯化、保种及扩大培养 | 第35-36页 |
| ·穿梭表达载体pDC-FBA 的构建 | 第36-40页 |
| ·水稻胞质 FBA 基因的获得 | 第36-38页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒 DNA | 第38页 |
| ·酶解反应体系 | 第38页 |
| ·酶切片段的纯化和回收 | 第38-39页 |
| ·连接反应体系 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第40页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第40页 |
| ·蓝藻的转化与筛选 | 第40-41页 |
| ·转基因藻的DNA 检测 | 第41页 |
| ·蓝藻的破碎 | 第41页 |
| ·蓝藻总 DNA 的提取 | 第41页 |
| ·PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·转基因蓝藻中酶活性的测定 | 第41-44页 |
| ·总可溶性蛋白质浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·转基因蓝藻中酶活性的测定 | 第42-44页 |
| ·转基因藻的生理活性检测 | 第44-45页 |
| ·生长曲线的测定 | 第44页 |
| ·OD_(750) 的测定 | 第44页 |
| ·蓝藻叶绿素a 含量的测定 | 第44-45页 |
| ·放氧光合活性的测定 | 第45-46页 |
| ·环境因子对转基因藻生长的影响 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-72页 |
| ·水稻胞质FBA 基因在蓝藻中的克隆与检测 | 第47-56页 |
| ·穿梭表达载体pDC-FBA 的构建 | 第47-52页 |
| ·PCR 调取基因片段一 | 第48-49页 |
| ·PCR 调取基因片段二 | 第49页 |
| ·二次PCR | 第49-50页 |
| ·中间表达载体pRL-FBA 的鉴定 | 第50-51页 |
| ·穿梭表达载体pDC-FBA 的鉴定 | 第51-52页 |
| ·蓝藻的转化与筛选 | 第52-53页 |
| ·转FBA 鱼腥藻的DNA 检测 | 第53-54页 |
| ·转FBA 鱼腥藻的FBA 酶活性检测 | 第54-56页 |
| ·蛋白定量标准曲线 | 第54页 |
| ·FBP 标准曲线 | 第54-55页 |
| ·转FBA 鱼腥藻粗提液中FBA 酶的比活力 | 第55-56页 |
| ·转FBA 鱼腥藻的生理活性测定 | 第56-72页 |
| ·基本生长条件的优化 | 第56-61页 |
| ·光照 | 第56-57页 |
| ·温度 | 第57-59页 |
| ·起始pH 值 | 第59-61页 |
| ·转 FBA 鱼腥藻的光合放氧活性测定 | 第61-63页 |
| ·NaHCO_3 对转 FBA 鱼腥藻生长的影响 | 第63-66页 |
| ·10mM NaHCO_3 对转 FBA 鱼腥藻光合放氧的影响 | 第66-69页 |
| ·不同初始pH 值下初始NaHCO_3 浓度对转基因藻生长的影响 | 第69-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| ·利用蓝藻基因工程过表达FBA 调控光合作用的可行性 | 第72-73页 |
| ·转FBA 基因对转基因藻光合放氧速率的影响及其可能原因 | 第73页 |
| ·FBA 转基因藻生长和pH 值的可能关系 | 第73-74页 |
| ·增加HCO~-_3使转FBA 鱼腥藻生长加速、光合活性提高的可能原因 | 第74-76页 |
| 5 总结与展望 | 第76-78页 |
| ·总结 | 第76-77页 |
| ·展望 | 第77-78页 |
| 6 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 论文独创性声明 | 第92页 |
| 论文使用授权声明 | 第92-93页 |
