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稻瘟病菌成熟附着胞cDNA文库的构建及转几丁质酶基因毛壳菌的抗病原真菌作用的研究

第一章 文献综述第1-33页
 1 稻瘟病菌第14页
 2 稻瘟病菌病侵染循环第14-15页
 3 稻瘟病菌附着胞形成过程第15-17页
 4 参与稻瘟病菌附着胞形成过程的基因第17-28页
   ·黑色素基因第17-18页
   ·孢子形成基因第18-19页
   ·参与植物表面识别和信号传导过程的基因第19-26页
   ·其它附着胞相关基因第26-28页
 5 稻瘟病菌致病相关基因的研究方法第28-32页
 6 本研究的目的和内容第32-33页
第二章 稻瘟病菌附着胞cDNA文库的构建第33-54页
 1 材料和方法第33-46页
   ·试验菌株、产孢培养和附着胞诱导第33页
   ·试剂和培养基第33-34页
   ·RNA提取和分析第34-36页
   ·长距离PCR法合成cDNA第36-40页
   ·cDNA文库构建第40-44页
   ·质粒pTriplEx2的插入片段的验证第44-45页
   ·部分重组pTriplEx2质粒的测序和EST序列分析第45页
   ·稻瘟病菌附着胞EST序列的登录第45-46页
 2 结果和分析第46-50页
   ·稻瘟病菌附着胞的诱导培养第46页
   ·附着胞总RNA的提取第46-47页
   ·cDNA的合成第47页
   ·cDNA文库的构建和质量分析第47-49页
   ·部分cDNA克隆的测序结果及其分析第49-50页
 3 讨论第50-52页
   ·稻瘟病菌附着胞诱导效率第50-51页
   ·附着胞RNA的提取和cDNA的合成策略第51页
   ·附着胞cDNA文库的质量和EST序列的分析第51-52页
 4 本章小结第52-54页
第三章 稻瘟病菌附着胞SSH差减文库的构建第54-87页
 1 材料和方法第54-63页
   ·试验菌株、产孢培养和附着胞诱导第54页
   ·试剂和培养基第54页
   ·RNA提取和分析第54-55页
   ·长距离PCR法合成cDNA第55页
   ·Alu I限制性内切酶消化第55-56页
   ·接头连接第56-57页
   ·第一次差减杂交第57-58页
   ·第二次差减杂交第58-59页
   ·PCR扩增第59-60页
   ·PCR反应液与pBS-T载体的连接第60页
   ·E Coli DH5α感受态细胞的制备第60-61页
   ·感受态细胞的转化第61页
   ·X-gal和IPTG直接用于琼脂平板第61-62页
   ·CTAB法抽提质粒第62页
   ·重组质粒的测序和EST序列分析第62页
   ·稻瘟病菌附着胞差减文库EST序列的登录第62页
   ·SSH差减文库克隆的RT-PCR分析第62-63页
 2 结果和分析第63-72页
   ·附着胞和菌丝、孢子的RNA提取第63-64页
   ·附着胞和菌丝、孢子ds cDNA合成第64-65页
   ·差减杂交cDNA的第一次PCR扩增结果第65页
   ·差减杂交cDNA的第二次PCR扩增结果第65页
   ·PCR产物与pBS-T载体的连接、转化和重组质粒提取第65页
   ·测序结果分析第65-70页
   ·RT-PCR验证SSH差减基因在附着胞中的表达特异性第70-72页
   ·43KD的DNA片段第72页
 3 讨论第72-78页
   ·SSH文库的构建第72-73页
   ·SSH cDNA文库分析第73-74页
   ·过氧化物酶体基因与乙醛酸循环第74-75页
   ·与附着胞形成和致病性有关的基因第75-76页
   ·与其它文库结果的比较第76页
   ·附着胞特异表达基因簇第76-78页
 4 本章小结第78-79页
 5 附录第79-87页
   ·附录1:RT-PCR引物第79-86页
   ·附录2:CM固体(液体)培养基配方第86-87页
第四章 转几丁质酶基因毛壳菌的抗病原真菌作用第87-100页
 1 材料和方法第87-93页
   ·质粒和菌株第87-88页
   ·球毛壳菌原生质体的制备第88-89页
   ·球毛壳菌原生质体的转化第89页
   ·CTAB法提取真菌基因组DNA第89-90页
   ·转chbi的CG12菌株的PCR验证第90-91页
   ·转chbi基因的CG12菌株的几丁质酶活性测定第91-92页
   ·拮抗试验第92-93页
 2 结果第93-97页
   ·毛壳菌原生质体的提取和转化第93页
   ·PCR验证结果第93-94页
   ·毛壳菌CG12转化子的几丁质酶活性第94页
   ·拮抗试验结果第94-97页
 3 讨论第97-99页
 4 本章小结第99-100页
 5 附录第100页
参考文献第100-112页

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