第一章 文献综述 | 第1-33页 |
1 稻瘟病菌 | 第14页 |
2 稻瘟病菌病侵染循环 | 第14-15页 |
3 稻瘟病菌附着胞形成过程 | 第15-17页 |
4 参与稻瘟病菌附着胞形成过程的基因 | 第17-28页 |
·黑色素基因 | 第17-18页 |
·孢子形成基因 | 第18-19页 |
·参与植物表面识别和信号传导过程的基因 | 第19-26页 |
·其它附着胞相关基因 | 第26-28页 |
5 稻瘟病菌致病相关基因的研究方法 | 第28-32页 |
6 本研究的目的和内容 | 第32-33页 |
第二章 稻瘟病菌附着胞cDNA文库的构建 | 第33-54页 |
1 材料和方法 | 第33-46页 |
·试验菌株、产孢培养和附着胞诱导 | 第33页 |
·试剂和培养基 | 第33-34页 |
·RNA提取和分析 | 第34-36页 |
·长距离PCR法合成cDNA | 第36-40页 |
·cDNA文库构建 | 第40-44页 |
·质粒pTriplEx2的插入片段的验证 | 第44-45页 |
·部分重组pTriplEx2质粒的测序和EST序列分析 | 第45页 |
·稻瘟病菌附着胞EST序列的登录 | 第45-46页 |
2 结果和分析 | 第46-50页 |
·稻瘟病菌附着胞的诱导培养 | 第46页 |
·附着胞总RNA的提取 | 第46-47页 |
·cDNA的合成 | 第47页 |
·cDNA文库的构建和质量分析 | 第47-49页 |
·部分cDNA克隆的测序结果及其分析 | 第49-50页 |
3 讨论 | 第50-52页 |
·稻瘟病菌附着胞诱导效率 | 第50-51页 |
·附着胞RNA的提取和cDNA的合成策略 | 第51页 |
·附着胞cDNA文库的质量和EST序列的分析 | 第51-52页 |
4 本章小结 | 第52-54页 |
第三章 稻瘟病菌附着胞SSH差减文库的构建 | 第54-87页 |
1 材料和方法 | 第54-63页 |
·试验菌株、产孢培养和附着胞诱导 | 第54页 |
·试剂和培养基 | 第54页 |
·RNA提取和分析 | 第54-55页 |
·长距离PCR法合成cDNA | 第55页 |
·Alu I限制性内切酶消化 | 第55-56页 |
·接头连接 | 第56-57页 |
·第一次差减杂交 | 第57-58页 |
·第二次差减杂交 | 第58-59页 |
·PCR扩增 | 第59-60页 |
·PCR反应液与pBS-T载体的连接 | 第60页 |
·E Coli DH5α感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
·感受态细胞的转化 | 第61页 |
·X-gal和IPTG直接用于琼脂平板 | 第61-62页 |
·CTAB法抽提质粒 | 第62页 |
·重组质粒的测序和EST序列分析 | 第62页 |
·稻瘟病菌附着胞差减文库EST序列的登录 | 第62页 |
·SSH差减文库克隆的RT-PCR分析 | 第62-63页 |
2 结果和分析 | 第63-72页 |
·附着胞和菌丝、孢子的RNA提取 | 第63-64页 |
·附着胞和菌丝、孢子ds cDNA合成 | 第64-65页 |
·差减杂交cDNA的第一次PCR扩增结果 | 第65页 |
·差减杂交cDNA的第二次PCR扩增结果 | 第65页 |
·PCR产物与pBS-T载体的连接、转化和重组质粒提取 | 第65页 |
·测序结果分析 | 第65-70页 |
·RT-PCR验证SSH差减基因在附着胞中的表达特异性 | 第70-72页 |
·43KD的DNA片段 | 第72页 |
3 讨论 | 第72-78页 |
·SSH文库的构建 | 第72-73页 |
·SSH cDNA文库分析 | 第73-74页 |
·过氧化物酶体基因与乙醛酸循环 | 第74-75页 |
·与附着胞形成和致病性有关的基因 | 第75-76页 |
·与其它文库结果的比较 | 第76页 |
·附着胞特异表达基因簇 | 第76-78页 |
4 本章小结 | 第78-79页 |
5 附录 | 第79-87页 |
·附录1:RT-PCR引物 | 第79-86页 |
·附录2:CM固体(液体)培养基配方 | 第86-87页 |
第四章 转几丁质酶基因毛壳菌的抗病原真菌作用 | 第87-100页 |
1 材料和方法 | 第87-93页 |
·质粒和菌株 | 第87-88页 |
·球毛壳菌原生质体的制备 | 第88-89页 |
·球毛壳菌原生质体的转化 | 第89页 |
·CTAB法提取真菌基因组DNA | 第89-90页 |
·转chbi的CG12菌株的PCR验证 | 第90-91页 |
·转chbi基因的CG12菌株的几丁质酶活性测定 | 第91-92页 |
·拮抗试验 | 第92-93页 |
2 结果 | 第93-97页 |
·毛壳菌原生质体的提取和转化 | 第93页 |
·PCR验证结果 | 第93-94页 |
·毛壳菌CG12转化子的几丁质酶活性 | 第94页 |
·拮抗试验结果 | 第94-97页 |
3 讨论 | 第97-99页 |
4 本章小结 | 第99-100页 |
5 附录 | 第100页 |
参考文献 | 第100-112页 |