灰树花GPD启动子及药效相关基因的克隆
| 摘要 | 第1-9页 |
| 引言与文献综述 | 第9-32页 |
| 1 引言 | 第9-13页 |
| ·生物学特性 | 第9-10页 |
| ·灰树花的食用、营养价值 | 第10-11页 |
| ·灰树花的保健、药用价值 | 第11-13页 |
| ·灰树花产品的加工 | 第13页 |
| 2 文献综述 | 第13-31页 |
| ·食用菌启动子的研究进展 | 第13-17页 |
| ·启动子概述 | 第13-14页 |
| ·同源启动子和异源启动子 | 第14页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第14-15页 |
| ·食用菌中分离克隆的启动子 | 第15-17页 |
| ·食用菌酪氨酸酶的研究进展 | 第17-24页 |
| ·概述 | 第17-18页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶的生化特征 | 第18-19页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶抑制剂的研究进展 | 第19-21页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶活性的研究 | 第21-22页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶的临床研究 | 第22-23页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶固定的研究 | 第23-24页 |
| ·结论 | 第24页 |
| ·灰树花多糖的文献综述 | 第24-28页 |
| ·灰树花多糖的结构种类、功效及二者之间的关系 | 第24-25页 |
| ·灰树花的D-fraction | 第25页 |
| ·灰树花多糖及其D-fraction的药用功能 | 第25-27页 |
| ·灰树花多糖的研究现状和发展前景 | 第27页 |
| ·1，3-β-D-葡聚糖的作用机理及合成途径 | 第27-28页 |
| ·食用菌免疫调节物质的研究进展 | 第28-31页 |
| ·有重要调节作用的免疫调节物质 | 第28-30页 |
| ·结论 | 第30-31页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第31页 |
| 4 技术路线 | 第31-32页 |
| 第一部分 GPD启动子的克隆与鉴定 | 第32-64页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| ·启动子克隆的材料 | 第32页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·质粒及菌种 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·假定启动子片段活性检测的材料 | 第32-33页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-48页 |
| ·灰树花基因组DNA的提取 | 第33-35页 |
| ·灰树花菌丝的培养 | 第33-34页 |
| ·灰树花基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·启动子的克隆 | 第35-39页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pGP的鉴定 | 第37-39页 |
| ·插入片段的DNA序列测定 | 第39页 |
| ·序列分析 | 第39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-45页 |
| ·表达载体的构建方法 | 第39-41页 |
| ·表达载体构建的具体操作步骤 | 第41-45页 |
| ·假定启动子的活性鉴定 | 第45-48页 |
| ·灰树花抗性标记试剂的筛选 | 第45-46页 |
| ·菌丝培养及原生质体的制备 | 第46页 |
| ·原生质体转化 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-63页 |
| ·灰树花总DNA提取 | 第48-50页 |
| ·灰树花母种培养基的优化 | 第48-49页 |
| ·灰树花总DNA提取 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增及序列测定 | 第50-58页 |
| ·PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·序列分析 | 第51-58页 |
| ·表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·表达载体的构建 | 第58页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第58-60页 |
| ·假定启动子的活性鉴定 | 第60-63页 |
| ·抗性标记试剂的筛选 | 第60-61页 |
| ·假定启动子的活性鉴定 | 第61-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 第二部分 灰树花药效相关基因的克隆 | 第64-76页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·质粒及菌种 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-69页 |
| ·灰树花基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·药效相关基因的克隆 | 第64-69页 |
| ·酪氨酸酶基因的克隆 | 第64-67页 |
| ·β-葡聚糖合酶基因的克隆 | 第67-68页 |
| ·免疫调节蛋白基因的克隆 | 第68-69页 |
| 3 结果和分析 | 第69-76页 |
| ·PCR扩增 | 第69-71页 |
| ·酪氨酸酶基因的PCR扩增 | 第69-70页 |
| ·β-葡聚糖合酶基因的PCR扩增 | 第70页 |
| ·免疫调节蛋白基因的PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·目的片段的克隆 | 第71-72页 |
| ·序列测定与分析 | 第72-74页 |
| ·酪氨酸酶基因引物扩增的片段序列同源性分析 | 第72-73页 |
| ·免疫调节蛋白基因引物扩增的片段序列同源性分析 | 第73-74页 |
| ·β-葡聚糖合酶基因引物扩增的片段序列同源性分析 | 第74页 |
| ·结论 | 第74-76页 |
| 第三部分 讨论 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
