芥菜胰蛋白酶抑制剂基因mti2转化拟南芥菜的研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-22页 |
| 1 课题的提出 | 第9-10页 |
| 2 前人研究进展 | 第10-21页 |
| ·蛋白酶抑制剂抗虫基因工程研究进展 | 第10-16页 |
| ·蛋白酶抑制剂的种类及其抗虫性 | 第10-12页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第10-12页 |
| ·巯基蛋白抑制剂 | 第12页 |
| ·蛋白酶抑制剂基因在抗虫转基因工程中的应用 | 第12-16页 |
| ·应用现状 | 第12-14页 |
| ·存在的问题 | 第14-15页 |
| ·解决的办法 | 第15-16页 |
| ·拟南芥转化方法概述 | 第16-21页 |
| ·农杆菌介导的叶圆盘转化法 | 第16-17页 |
| ·原位渗入转化技术 | 第17-21页 |
| ·原位渗入转化法的产生及其发展 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导原位渗入转化技术的优势 | 第19页 |
| ·原位渗入转化的机理 | 第19-21页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-32页 |
| 1 质粒及农杆菌菌株 | 第22页 |
| 2 植物材料的准备 | 第22页 |
| 3 原位渗入转化 | 第22-24页 |
| ·所用试剂、仪器和培养基 | 第22-23页 |
| ·工程菌的活化 | 第23页 |
| ·转化用菌液的准备 | 第23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·转化种子的筛选 | 第23-24页 |
| 4 抗性植株的PCR检测 | 第24-26页 |
| ·主要仪器试剂和PCR引物 | 第24-25页 |
| ·植物DNA的提取 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| 5 抗性植株的PCR-Southern杂交 | 第26-29页 |
| ·所用试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA提取 | 第27页 |
| ·杂交探针用DNA片段的准备 | 第27页 |
| ·杂交 | 第27-29页 |
| ·目的片段的PCR扩 | 第27页 |
| ·扩增产物的琼脂糖电泳及转膜 | 第27-28页 |
| ·杂交 | 第28-29页 |
| 6 转化植株的RT-PCR检测 | 第29-32页 |
| ·试剂和仪器 | 第29页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·RNA的DNAase处理 | 第30页 |
| ·一步法RT-PCR的反应体系 | 第30-31页 |
| ·一步法RT-PCR的反应程序 | 第31-32页 |
| 结果与分析 | 第32-38页 |
| 1 转化当代植株上收获的种子(T1)的筛选 | 第32-33页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·野生型拟南芥种子的Km抗性鉴定 | 第32页 |
| ·T1代转化种子的筛选 | 第32-33页 |
| 2 抗性植株的PCR检测 | 第33-34页 |
| ·植株叶片DNA提取结果 | 第33页 |
| ·PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 3 抗性植株的PCR-Southern杂交结果 | 第34-36页 |
| ·质粒DNA的提取结果 | 第34-35页 |
| ·目的片段的扩增和回收 | 第35-36页 |
| ·杂交结果 | 第36页 |
| 4 抗性植株的RT-CR检测 | 第36-38页 |
| ·转化植株叶片RNA的提取结果 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-42页 |
| 1 关于芥菜胰蛋白酶抑制剂 | 第38页 |
| 2 关于原位渗透转化法 | 第38-39页 |
| ·转化的适宜时期 | 第38-39页 |
| ·关于表面活性剂 | 第39页 |
| 3 关于抗生素Km的使用浓度 | 第39-40页 |
| 4 PCR检测的可靠性 | 第40页 |
| 5 一步法RT-PCR检测及其优越性 | 第40-41页 |
| 6 下一步的工作设想 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 缩写词表 | 第50-51页 |
| 图版 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
