| 第一章 文献综述 | 第1-36页 |
| 1 紫菜生物技术研究进展 | 第11-22页 |
| 2 基因打靶技术的研究进展 | 第22-29页 |
| 3 藻类种质超低温保存的研究进展 | 第29-34页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第34-36页 |
| 第二章 条斑紫菜纯系的建立及其18S RDNA序列测定 | 第36-46页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-40页 |
| ·紫菜纯系的建立 | 第37页 |
| ·紫菜基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·18S rDNA的PCR扩增 | 第38页 |
| ·克隆载体pBS-T的制备 | 第38页 |
| ·PCR产物克隆与测序 | 第38-39页 |
| ·序列分析与进化树的构建 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·条斑紫菜营养体纯系的建立 | 第40页 |
| ·紫菜基因DNA的提取 | 第40页 |
| ·紫菜18S rDNA基因的PCR扩增、克隆、及序列测定 | 第40-43页 |
| ·紫菜18S rDNA外显子及内含子序列的比较 | 第43-44页 |
| ·紫菜系统进化树的构建 | 第44-46页 |
| 第三章 GUS基因在条斑紫菜原生质中的瞬时表达 | 第46-59页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| ·紫菜原生质体的制备 | 第48页 |
| ·表达载体pBS-GUS和pQD-GUS的构建 | 第48页 |
| ·重组质粒DBS-GUS和pQD-GUS的纯化 | 第48-49页 |
| ·电击转化紫菜原生质体 | 第49页 |
| ·GUS活性的检测 | 第49-50页 |
| ·紫菜基因组DNA的提取 | 第50页 |
| ·外源基因整合的PCR检测 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·表达载体pBS-GUS和pQD-GUS的构建 | 第51-52页 |
| ·GUS活性的检测 | 第52-56页 |
| ·外源基因整合的PCR鉴定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)在紫菜中的表达 | 第59-71页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-65页 |
| ·紫菜原生质体的制备 | 第60页 |
| ·表达载体pQD-CAT-Control和pQD-CAT-Enhancer的构建 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pQD-CAT-Control和pQD-CAT-Enhancer的纯化 | 第61页 |
| ·电击转化原生质体 | 第61-62页 |
| ·氯霉素筛选 | 第62页 |
| ·CAT活性的检测 | 第62页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第62-65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| ·表达载体pQO-CAT-Control和pQD-CAT-Enhancer的构建 | 第65-66页 |
| ·筛选结果及CAT活性的检测 | 第66页 |
| ·外源基因整合的PCR-Southern blot分析 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 TRAIL CDNA的克隆及其同源重组型表达载体构建 | 第71-81页 |
| 1 材料 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-76页 |
| ·肾细胞总RNA的提取 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR扩增TRAIL的cDNA | 第73页 |
| ·PCR产物的克隆及测序 | 第73-74页 |
| ·表达载体pQD-TRAIL-CAT的构建 | 第74页 |
| ·重组质粒pQD-TRAIL-CAT的纯化 | 第74页 |
| ·紫菜原生质体的制备 | 第74页 |
| ·电击转化原生质体 | 第74页 |
| ·氯霉素筛选 | 第74-76页 |
| ·外源基因整合的PCR检测 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-80页 |
| ·TRAIL cDNA的合成及重组质粒pBS-TRAIL的鉴定 | 第76-77页 |
| ·TRAIL cDNA序列测定 | 第77页 |
| ·表达载体pQD-TRAIL-CAT的构建 | 第77-78页 |
| ·氯霉素筛选结果 | 第78-79页 |
| ·外源基因整合的PCR分析 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-81页 |
| 第六章 条斑紫菜原生质体的玻璃化法超低温保存 | 第81-92页 |
| 1 材料 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-84页 |
| ·紫菜原生质体的制备 | 第82页 |
| ·玻璃化保护剂的选择及其对原生质体的毒性测定 | 第82页 |
| ·原生质体的玻璃化冻存 | 第82-83页 |
| ·化冻与洗涤 | 第83页 |
| ·过渡时间的优化 | 第83-84页 |
| ·脱水时间的优化 | 第84页 |
| ·化冻温度的优化 | 第84页 |
| ·原生质体存活率检测 | 第84页 |
| ·植株再生 | 第84页 |
| 3 结果 | 第84-89页 |
| ·玻璃化保护剂的筛选 | 第84-86页 |
| ·过渡时间对原生质体冻存效果的影响 | 第86页 |
| ·脱水时间对原生质体冻存效果的影响 | 第86页 |
| ·化冻温度对原生质体冻存效果的影响 | 第86-88页 |
| ·植株再生 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-92页 |
| 结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-112页 |
