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胡桐细胞培养生产红厚壳素的细胞工程研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-17页
第一章 绪论第17-39页
   ·前言第17页
   ·来源于植物的抗HIV天然化合物第17-18页
   ·抗HIV香豆素化合物的发现及来源第18-21页
     ·抗HIV香豆素化合物的发现第18-21页
     ·抗HIV香豆素化合物的植物来源第21页
   ·香豆素化合物的构效关系第21-22页
   ·香豆素类化合物抗HIV机制第22-25页
   ·香豆素类化合物与其他HIV抑制药物的协同性及HIV病毒的抗药性第25-26页
   ·香豆素类化合物的药理特性与检测第26-28页
   ·抗HIV香豆素类化合物的化学合成第28-29页
   ·藤黄科胡桐植物的特征第29-30页
     ·我国胡桐植物的分布第29页
     ·胡桐植物的形态及生态特征第29-30页
     ·胡桐植物的用途第30页
     ·国内对胡桐活性物质的研究进展第30页
   ·生产植物次生代谢物的植物细胞工程第30-36页
     ·植物次生代谢物与植物细胞培养第30-31页
     ·植物细胞工程及相关的应用技术第31-36页
       ·高压静电场促进植物细胞分化第32页
       ·植物细胞的无载体固定化培养第32页
       ·刺激剂及前体物的添加第32-34页
       ·抑制剂的使用第34页
       ·反义技术第34-35页
       ·次生代谢物的生物合成途径及其限速酶第35页
       ·两相培养技术第35-36页
     ·植物细胞工程研究中存在的主要问题第36页
   ·立项背景及主要研究内容第36-39页
     ·立项背景第36-37页
     ·本研究的主要内容第37-39页
第二章 材料与方法第39-46页
   ·试验材料第39-41页
     ·植物材料第39页
     ·培养基第39-40页
       ·愈伤组织诱导培养基及继代培养基第39-40页
       ·细胞的液体悬浮培养基第40页
       ·真菌生长PDA培养基第40页
     ·主要试剂第40-41页
   ·主要仪器与设备第41页
   ·实验方法第41-46页
     ·胡桐无菌幼苗的培养第41页
     ·胡桐愈伤组织的诱导第41页
     ·胡桐愈伤组织的继代培养及选优第41-42页
     ·高产愈伤组织系生长培养基的优化第42页
     ·胡桐细胞悬浮培养第42页
     ·愈伤组织或细胞生长的生物量表征第42页
     ·细胞破碎第42页
     ·胡桐植株挥发性成分的GC-MS分析第42-43页
     ·胡桐植株中红厚壳素的粗提第43页
     ·红厚壳素的薄层层析第43页
     ·红厚壳素测定第43-44页
     ·病原真菌的分离培养第44页
     ·菌液中葡萄糖的测定第44页
     ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性测定第44-45页
     ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)的活性测定第45页
     ·酶液蛋白质含量的测定第45-46页
第三章 胡桐植物资源调查与成分初步分析第46-57页
   ·胡桐植物资源调查第46-48页
     ·考察路线第46页
     ·胡桐的形态特征第46页
     ·胡桐在海南岛的分布第46页
     ·胡桐的生长特征及其当地用途第46-48页
   ·胡桐叶成分的GC-MS分析第48-51页
   ·胡桐红厚壳素的HPLC分析第51-52页
     ·色谱条件第51页
     ·胡桐植物待测样品的制备第51页
     ·HPLC中吸收峰面积与红厚壳素浓度的关系第51-52页
     ·待测样品的HPLC检测第52页
   ·本章小结第52-57页
第四章 胡桐愈伤组织的诱导第57-64页
   ·外植体的初选第57页
   ·愈伤组织的诱导过程第57-58页
   ·基本培养基的选择第58-60页
   ·不同光照处理对愈伤组织诱导的影响第60-61页
   ·不同激素组合对胡桐愈伤组织生长的影响第61-63页
   ·本章小结第63-64页
第五章 高产愈伤组织系选育及培养基优化第64-73页
   ·高产愈伤组织系的选育第64-67页
     ·选育的理论依据第64页
     ·愈伤组织系的初步筛选第64-65页
     ·15个愈伤组织系红厚壳素含量的比较第65-67页
   ·胡桐愈伤组织培养基的优化第67-72页
     ·关于二次正交旋转组合设计第67-68页
     ·二次正交旋转组合设计方案及其试验结果第68-69页
     ·不同参试因子与CR2愈伤组织生长指数关系模型的建立第69-70页
     ·回归数学模型的模拟寻优与实例验证第70-71页
     ·影响CR2愈伤组织生长指数的主因子效应分析第71-72页
   ·本章小结第72-73页
第六章 CR2细胞系悬浮培养的动力学分析第73-82页
   ·胡桐CR2细胞的悬浮培养第73页
   ·培养过程中CR2细胞系生长的动力学研究第73-77页
     ·Mo液体培养基中CR2细胞生长的动力学过程第73-74页
     ·不同起始蔗糖浓度对细胞生长的影响第74-75页
     ·NH_4~+/NO_3~-对CR2悬浮培养细胞生长的影响第75-76页
     ·氮源总量对CR2悬浮培养细胞生长的影响第76-77页
   ·CR2细胞系培养过程中红厚壳素积累的动力学研究第77-81页
     ·Mo液体培养基第77-78页
     ·不同的起始蔗糖浓度第78-79页
     ·不同的NH_4~-NO_3~-比例第79-80页
     ·不同的氮源总量第80-81页
   ·本章小结第81-82页
第七章 真菌刺激剂对红厚壳素产生的影响第82-94页
   ·真菌刺激剂的来源第83-85页
     ·真菌刺激剂的发现第83页
     ·真菌刺激剂的分离培养与鉴定第83-84页
     ·真菌刺激剂的制备第84-85页
   ·真菌刺激剂浓度的影响第85-87页
   ·真菌刺激剂作用下胡桐CR2悬浮培养细胞生长及红厚壳素积累的动力学过程第87-91页
     ·对CR2细胞生长过程的影响第87-88页
     ·对红厚壳素积累的影响第88-91页
   ·真菌刺激剂(S-I)加入时间的影响第91-93页
     ·真菌刺激剂加入时间对细胞生物量的影响第91-92页
     ·真菌刺激剂加入时间对红厚壳素产量的影响第92-93页
   ·本章小结第93-94页
第八章 红厚壳素合成途径的关键酶分析第94-105页
   ·引言第94-96页
   ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)与红厚壳素的积累第96-102页
     ·CR2细胞悬浮培养过程中PAL活性的变化第96-97页
     ·S-I真菌刺激剂加入对PAL活性的影响第97-99页
     ·刺激剂浓度对PAL活性的影响第99-100页
     ·PAL抑制物对红厚壳素生物合成的影响第100-101页
     ·对PAL的关键酶分析第101-102页
   ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)与红厚壳素的积累第102-103页
     ·CR2细胞悬浮培养过程中G6PDH活性变化第102-103页
     ·真菌刺激剂作用下G6PDH活性的变化第103页
   ·光照对红厚壳素产生的影响第103-104页
   ·本章小结第104-105页
结论与展望第105-108页
参考文献第108-123页
攻读学位期间发表论文第123-124页
致谢第124页

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