| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第17-38页 |
| 1 香蕉在农业生产中的地位及其品种选育 | 第17-19页 |
| ·香蕉在农业生产中的地位 | 第17页 |
| ·香蕉品种的选育 | 第17-19页 |
| ·香蕉的品种类型 | 第17-18页 |
| ·香蕉品种常规选育手段的局限性 | 第18-19页 |
| ·应用基因工程改良香蕉品种的优越性 | 第19页 |
| 2 果实成熟与乙烯 | 第19-28页 |
| ·果实成熟与乙烯的关系 | 第19-20页 |
| ·乙烯的生物合成 | 第20-21页 |
| ·果实成熟与乙烯的分子生物学研究 | 第21-28页 |
| ·乙烯生物合成的分子生物学 | 第21-23页 |
| ·ACS的分离和鉴定及其编码基因的克隆 | 第21-23页 |
| ·ACO的分离与其编码基因的克隆 | 第23页 |
| ·乙烯的感知及其信号传导 | 第23-28页 |
| ·乙烯的感知 | 第24-27页 |
| ·乙烯信号传导 | 第27-28页 |
| 3 RNAi现象的揭示及其研究进展与应用前景 | 第28-36页 |
| ·RNAi现象的揭示 | 第28-30页 |
| ·RNAi的研究进展 | 第30-33页 |
| ·RNAi形成的机制 | 第30-31页 |
| ·RNAi表现出的几个特征 | 第31-33页 |
| ·RNAi的生物学意义 | 第33页 |
| ·RNAi的应用前景 | 第33-36页 |
| 4 本研究目的意义和技术线路 | 第36-38页 |
| Ⅱ 香蕉果实总RNA的提取及乙烯受体基因的克隆 | 第38-49页 |
| 1 材料方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·香蕉果实总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR引物设计与合成 | 第39页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR片段的回收 | 第40-41页 |
| ·回收的RT-PCR片段与T-载体连接 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第42页 |
| ·质粒提取酶切及阳性克隆测序 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-48页 |
| ·香蕉果实总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR及回收带 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·克隆片段的测序 | 第45-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| ·香蕉果实总RNA的提取 | 第48-49页 |
| ·关于克隆到的小片段(基因) | 第49页 |
| Ⅲ 香蕉乙烯受体基因在不同香蕉品种类型中分布的Southern分析 | 第49-54页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·香蕉叶片DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·探针的制备 | 第50-51页 |
| ·香蕉叶片基因组DNA的酶切、电泳分离及DNA印迹转移 | 第51-52页 |
| ·Southern杂交 | 第52页 |
| ·酶联反应显色检测 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·香蕉叶片基因组DNA提取及Eco RI酶切 | 第52-53页 |
| ·探针制备和Southern杂交 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54页 |
| Ⅳ RT-PC分析乙烯受体基因在香蕉根、叶及不同成熟阶段果实中的差异表达 | 第54-58页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·香蕉根、叶片总RNA的提取 | 第55-56页 |
| ·香蕉不同成熟阶段果实总RNA的提取 | 第56页 |
| ·RT-PCR引物设计与合成 | 第56页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-57页 |
| ·根、叶片和不同成熟阶段果实总RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·根、叶片和不同成熟阶段果实总RNA的RT-PCR扩增 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR应用于分析基因差异性表达 | 第57-58页 |
| ·关于乙烯受体基因的表达 | 第58页 |
| Ⅴ 香蕉果实ACS和MSETRl基因的dsRNA导入香蕉果实的RNA i研究 | 第58-74页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-65页 |
| ·香蕉ACC的si RNA设计及化学合成 | 第58-59页 |
| ·表达香蕉乙烯受体基因ds RNA的植物表达载体的构建 | 第59-64页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·PCR分别扩增Ⅰ区段反向(AI)和Ⅰ区5’端正向(S5I)的DNA片段 | 第60-61页 |
| ·目的片段回收及克隆 | 第61页 |
| ·把S5I片段克隆到pMDT-AI中建立中间克隆载体pMDT-S5I-AI | 第61-62页 |
| ·构建pCAMBIA1301-S5I-AI植物表达载体 | 第62-63页 |
| ·构建pCAMBIA2301-S5I-AI植物表达载体 | 第63-64页 |
| ·基因枪法把siRNA和pCAMBIA2301-S5I-AI导入香蕉果实(细胞) | 第64-65页 |
| ·注射法把siRNA注入香蕉果实(细胞) | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-71页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-S5I-AI的构建 | 第65-70页 |
| ·双链RNA转化香蕉果实的RNAi效果 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| ·RNAi研究中含正反重复序列的表达载体的构建 | 第71-73页 |
| ·关于双链RNA的转化导入及其分子检测问题 | 第73-74页 |
| ·关于RNAi干扰的效果问题 | 第74页 |
| Ⅵ 香蕉乙烯受体基因的ds RNA表达载体转化拟南芥的RNA i研究 | 第74-82页 |
| 1 材料与方法 | 第74-79页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-79页 |
| ·表达香蕉乙烯受体基因ds RNA的植物载体的构建 | 第75页 |
| ·pCAMBIA2301-S5I-AI直接转化农杆菌GV3101 | 第75-76页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第75页 |
| ·农杆菌感受态转化 | 第75-76页 |
| ·菌落原位杂交筛选阳性克隆 | 第76页 |
| ·真空渗入法转入拟南芥中 | 第76-77页 |
| ·植株种植 | 第76-77页 |
| ·农杆菌大量培养 | 第77页 |
| ·真空渗入转化 | 第77页 |
| ·转化后植株管理 | 第77页 |
| ·拟南芥幼苗对卡那霉素的敏感性测试 | 第77-78页 |
| ·拟南芥幼苗对乙烯的敏感性测试 | 第78页 |
| ·转化拟南芥幼苗鉴定及其“三重反应”形态变化分析 | 第78-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-82页 |
| ·pCAMBIA2301-S5I-AI转化农杆菌 | 第79页 |
| ·转化拟南芥幼苗“三重反应”形态变化 | 第79-82页 |
| ·拟南芥幼苗对卡那霉素的敏感性试验验 | 第79-80页 |
| ·拟南芥幼苗对乙烯的敏感性 | 第80页 |
| ·转化拟南芥幼苗“三重反应”形态变化 | 第80-82页 |
| Ⅶ 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附录 | 第98页 |
