| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-28页 |
| 实验材料 | 第28-34页 |
| 实验方法 | 第34-48页 |
| 1 大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第34-35页 |
| 2 大肠杆菌质粒DNA大量提取 | 第35页 |
| 3 限制酶切反应 | 第35页 |
| 4 去磷酸化反应 | 第35页 |
| 5 寡核苷酸片段的磷酸化 | 第35页 |
| 6 PCR反应 | 第35-36页 |
| 7 DNA电泳及片段回收 | 第36页 |
| 8 DNA连接反应 | 第36-37页 |
| 9 E.coli DH-5α感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 10 质粒DNA转化E.coli DH-5α | 第37页 |
| 11 E.coli转化子的快速鉴定 | 第37页 |
| 12 真核细胞培养所用培养基的配制 | 第37-38页 |
| 13 RNA抽提及准备 | 第38-39页 |
| 14 RT-PCR | 第39-41页 |
| 15 Northrtn Blot | 第41-44页 |
| 16 Western Blot | 第44-46页 |
| 17 质粒转染真核细胞 | 第46页 |
| 18 荧光显微观察及拍照 | 第46页 |
| 19 细胞增殖速度测定 | 第46-47页 |
| 20 测定细胞的周期变化及凋亡 | 第47页 |
| 21 基因组DNA片段化的检测 | 第47页 |
| 22 真核细胞的冻存 | 第47-48页 |
| 结果与讨论 | 第48-71页 |
| 第一章 小干扰RNA体内高效表达系统的建立及检测 | 第48-58页 |
| 一. 小干扰RNA体内高效表达系统的建立 | 第48-51页 |
| 1 hsnU6RNA基因 | 第48-49页 |
| 2 hsnU6RNA基因的PCR克隆 | 第49页 |
| 3 U6变体基因的PCR克隆 | 第49-50页 |
| 4 系统的完成 | 第50-51页 |
| 二. 所构建的载体系统体外及体内活性鉴定 | 第51-58页 |
| 1 U6变体RNA表达的体外检测 | 第51页 |
| 2 RNA干扰的体内活性鉴定 | 第51-58页 |
| 第二章 RNA干扰方法学的初步探讨 | 第58-62页 |
| 一. RNA干扰靶位点的选择及重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| 1 RNA干扰靶位点的选择 | 第58-60页 |
| 2 重组质粒的构建 | 第60页 |
| 二. RNA干扰不同靶位点的作用效果比较 | 第60-62页 |
| 1 针对绿色荧光蛋白基因不同靶位点的RNA干扰效果比较 | 第60-61页 |
| 2 针对CR-1基因不同靶位点的RNA干扰效果比较 | 第61-62页 |
| 第三章 细胞调控因子-1基因生物功能的研究 | 第62-71页 |
| 一. 细胞调控因子-1基因(CR-1)表达的下调 | 第62-67页 |
| 1 抑制CR-1基因的小干扰RNA表达质粒的构建 | 第62-63页 |
| 2 CR-1基因表达水平的检测 | 第63-65页 |
| 3 CR-1基因缺失突变株的筛选和检测 | 第65-67页 |
| 二. 细胞调控因子-1基因(CR-1)生物功能的研究 | 第67-71页 |
| 1 细胞形态学变化 | 第67-68页 |
| 2 细胞增殖速度的变化 | 第68页 |
| 3 细胞周期及凋亡的变化 | 第68-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 硕士研究生期间发表及准备中的文章及专利 | 第76页 |
