DNA改组和筛选获得大肠杆菌乳糖操纵子超级阻遏蛋白
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-31页 |
| 第一章 体外分子进化的研究进展 | 第11-24页 |
| 1 体外定向进化构建重组文库技术的发展 | 第11-18页 |
| ·错误倾向PCR | 第11-12页 |
| ·DNA改组 | 第12-15页 |
| ·StEP重组 | 第15页 |
| ·随机引物体外重组法 | 第15-16页 |
| ·酵母增强组合文库 | 第16页 |
| ·渐增切割法产生杂合酶 | 第16-17页 |
| ·过渡模板随机嵌合生长 | 第17页 |
| ·不依赖序列同源性的重组 | 第17-18页 |
| 2 体外定向进化技术筛选方法的发展 | 第18-21页 |
| ·表型观察筛选 | 第18-19页 |
| ·96孔板筛选 | 第19页 |
| ·表面展示技术 | 第19-21页 |
| 3 体外分子定向进化的应用 | 第21-24页 |
| ·基础理论研究 | 第21页 |
| ·工业酶的研究 | 第21-22页 |
| ·医药研究 | 第22-24页 |
| 第二章 大肠杆菌乳糖操纵子阻遏蛋白的研究进展 | 第24-31页 |
| 1 大肠杆菌乳糖操纵子 | 第24-27页 |
| ·大肠杆菌乳糖操纵子模型 | 第24-26页 |
| ·大肠杆菌乳糖操纵子调控机制 | 第26-27页 |
| 2 乳糖操纵子阻遏蛋白的研究进展 | 第27-31页 |
| ·乳糖操纵子阻遏蛋白的结构 | 第27-29页 |
| ·乳糖操纵子阻遏蛋白的阻遏机制 | 第29-30页 |
| ·阻遏蛋白的研究发展 | 第30-31页 |
| 第二部分 研究报告 | 第31-52页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-39页 |
| ·DNA改组技术 | 第31-32页 |
| ·SDS碱裂解法制各质粒DNA:小量制备 | 第32-33页 |
| ·裂解法制备质粒DNA:大量制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌电击感受态细胞制备和电击转化 | 第34页 |
| ·氯化钙化学法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·化学法转化 | 第35页 |
| ·DNA凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·DNA回收方法 | 第36-37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·蓝白筛选法筛选超级阻遏蛋白突变体 | 第38页 |
| ·阻遏蛋白突变基因鉴定 | 第38页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第38-39页 |
| ·测序和序列分析 | 第39页 |
| 3 实验结果 | 第39-50页 |
| ·原核表达载体pYF6683的构建 | 第39-40页 |
| ·DNA改组 | 第40-42页 |
| ·突变lacI基因筛选筛选 | 第42-43页 |
| ·突变lacI基因鉴定 | 第43-44页 |
| ·测活 | 第44-45页 |
| ·测序和序列分析 | 第45-50页 |
| 4 小结和讨论 | 第50-52页 |
| 附录 | 第52-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
