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水稻雄性不育性恢复基因Rf3的遗传定义及物理图构建

摘要(中文)第1-3页
Abstract(英文)第3-4页
缩略词及英汉对照第4-8页
1. 文献综述第8-20页
 1.1 水稻杂种优势利用的历史现状与展望第8-9页
 1.2 野败型水稻雄性不育性及其恢复性机理的研究进展第9-11页
 1.3 基因克隆的方法和原理第11-20页
  1.3.1 已知基因表达产物的基因克隆第11页
   1.3.1.1 蛋白质序列起始克隆法第11页
   1.3.1.2 蛋白质功能互补克隆法第11页
  1.3.2 未知基因表达产物的基因克隆第11-20页
   1.3.2.1 基因标签法第11-12页
   1.3.2.2 基因序列同源克隆法第12页
   1.3.2.3 mRNA差异显示法第12页
   1.3.2.4 图位克隆法第12-20页
2. 研究的目的和意义第20-22页
3. 材料和方法第22-32页
 3.1 实验材料第22-25页
  3.1.1 供试水稻材料第22页
  3.1.2 分子标记和候选YAC克隆第22页
  3.1.3 载体第22页
  3.1.4 PCR引物第22-23页
  3.1.5 主要试剂第23页
  3.1.6 主要仪器设备第23页
  3.1.7 主要溶液配方第23-25页
 3.2 实验方法第25-32页
  3.2.1 亲本和F2群体总DNA的提取第25-26页
  3.2.2 酵母总DNA的微量提取第26页
  3.2.3 亚克隆操作第26-27页
   3.2.3.1 酵母完整染色体DNA的制备第26页
   3.2.3.2 完整YAC DNA的分离第26-27页
   3.2.3.3 YAC克隆的亚克隆第27页
  3.2.4 RFLP分析第27-29页
   3.2.4.1 水稻总DNA的酶切、电泳及southern Blotting第27页
   3.2.4.2 探针的制备第27-28页
   3.2.4.3 探针的标记方法第28页
   3.2.4.4 预杂交及杂交第28页
   3.2.4.5 洗膜及自显影第28页
   3.2.4.6 DNA探针的洗脱第28-29页
   3.2.4.7 多态分子标记与Rf-3位点的连锁分析第29页
  3.2.5 基因组文库的建立第29-30页
   3.2.5.1 水稻核DNA超大分子的提取第29页
   3.2.5.2 感受态细胞的制备第29页
   3.2.5.3 基因组DNA部分酶切与连接第29页
   3.2.5.4 电激转化第29页
   3.2.5.5 重组子鉴定和文库保存第29-30页
  3.2.6 基因组文库的筛选和物理图的建立第30-32页
   3.2.6.1 高密度膜的制备第30页
   3.2.6.2 染色体着陆和染色体步移第30页
   3.2.6.3 TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR)第30-32页
4. 结果第32-42页
 4.1 与Rf3相关区段的水稻YAC重叠群的建立第32页
 4.2 YAC克隆的分离和亚克隆第32-33页
 4.3 RAPD和RFLP分析第33-34页
  4.3.1 RAPD分析第33页
  4.3.2 RFLP分析第33页
  4.3.3 YAC亚克隆片段的RFLP分析第33-34页
 4.4 多态探针的群体分析和Rf3的进一步精细定位第34-38页
 4.5 基因组文库的建立第38-39页
 4.6 与Rf3基因相关的物理图的建立第39-42页
  4.6.1 染色体着陆第39-40页
  4.6.2 染色体步移填补克隆间的空隙第40-42页
5. 讨论第42-46页
 5.1 TAC载体在图位克隆应用上的优越性第42-44页
 5.2 重复序列对染色体步移的不良影响第44页
 5.3 问题与展望第44-46页
参考文献第46-50页
附录第50-51页
致谢第51页

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