摘要(中文) | 第1-3页 |
Abstract(英文) | 第3-4页 |
缩略词及英汉对照 | 第4-8页 |
1. 文献综述 | 第8-20页 |
1.1 水稻杂种优势利用的历史现状与展望 | 第8-9页 |
1.2 野败型水稻雄性不育性及其恢复性机理的研究进展 | 第9-11页 |
1.3 基因克隆的方法和原理 | 第11-20页 |
1.3.1 已知基因表达产物的基因克隆 | 第11页 |
1.3.1.1 蛋白质序列起始克隆法 | 第11页 |
1.3.1.2 蛋白质功能互补克隆法 | 第11页 |
1.3.2 未知基因表达产物的基因克隆 | 第11-20页 |
1.3.2.1 基因标签法 | 第11-12页 |
1.3.2.2 基因序列同源克隆法 | 第12页 |
1.3.2.3 mRNA差异显示法 | 第12页 |
1.3.2.4 图位克隆法 | 第12-20页 |
2. 研究的目的和意义 | 第20-22页 |
3. 材料和方法 | 第22-32页 |
3.1 实验材料 | 第22-25页 |
3.1.1 供试水稻材料 | 第22页 |
3.1.2 分子标记和候选YAC克隆 | 第22页 |
3.1.3 载体 | 第22页 |
3.1.4 PCR引物 | 第22-23页 |
3.1.5 主要试剂 | 第23页 |
3.1.6 主要仪器设备 | 第23页 |
3.1.7 主要溶液配方 | 第23-25页 |
3.2 实验方法 | 第25-32页 |
3.2.1 亲本和F2群体总DNA的提取 | 第25-26页 |
3.2.2 酵母总DNA的微量提取 | 第26页 |
3.2.3 亚克隆操作 | 第26-27页 |
3.2.3.1 酵母完整染色体DNA的制备 | 第26页 |
3.2.3.2 完整YAC DNA的分离 | 第26-27页 |
3.2.3.3 YAC克隆的亚克隆 | 第27页 |
3.2.4 RFLP分析 | 第27-29页 |
3.2.4.1 水稻总DNA的酶切、电泳及southern Blotting | 第27页 |
3.2.4.2 探针的制备 | 第27-28页 |
3.2.4.3 探针的标记方法 | 第28页 |
3.2.4.4 预杂交及杂交 | 第28页 |
3.2.4.5 洗膜及自显影 | 第28页 |
3.2.4.6 DNA探针的洗脱 | 第28-29页 |
3.2.4.7 多态分子标记与Rf-3位点的连锁分析 | 第29页 |
3.2.5 基因组文库的建立 | 第29-30页 |
3.2.5.1 水稻核DNA超大分子的提取 | 第29页 |
3.2.5.2 感受态细胞的制备 | 第29页 |
3.2.5.3 基因组DNA部分酶切与连接 | 第29页 |
3.2.5.4 电激转化 | 第29页 |
3.2.5.5 重组子鉴定和文库保存 | 第29-30页 |
3.2.6 基因组文库的筛选和物理图的建立 | 第30-32页 |
3.2.6.1 高密度膜的制备 | 第30页 |
3.2.6.2 染色体着陆和染色体步移 | 第30页 |
3.2.6.3 TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR) | 第30-32页 |
4. 结果 | 第32-42页 |
4.1 与Rf3相关区段的水稻YAC重叠群的建立 | 第32页 |
4.2 YAC克隆的分离和亚克隆 | 第32-33页 |
4.3 RAPD和RFLP分析 | 第33-34页 |
4.3.1 RAPD分析 | 第33页 |
4.3.2 RFLP分析 | 第33页 |
4.3.3 YAC亚克隆片段的RFLP分析 | 第33-34页 |
4.4 多态探针的群体分析和Rf3的进一步精细定位 | 第34-38页 |
4.5 基因组文库的建立 | 第38-39页 |
4.6 与Rf3基因相关的物理图的建立 | 第39-42页 |
4.6.1 染色体着陆 | 第39-40页 |
4.6.2 染色体步移填补克隆间的空隙 | 第40-42页 |
5. 讨论 | 第42-46页 |
5.1 TAC载体在图位克隆应用上的优越性 | 第42-44页 |
5.2 重复序列对染色体步移的不良影响 | 第44页 |
5.3 问题与展望 | 第44-46页 |
参考文献 | 第46-50页 |
附录 | 第50-51页 |
致谢 | 第51页 |