| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 第一部分：转座子应用于人类体细胞靶向性基因治疗的探索性研究 | 第20-53页 |
| 第一部分前言 | 第20-24页 |
| 第一部分材料与方法 | 第24-36页 |
| (一) 材料 | 第24-25页 |
| 1.菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.细胞系 | 第24页 |
| 3.限制性内切酶及修饰酶 | 第24页 |
| 4.其它主要试剂 | 第24-25页 |
| 5.主要仪器 | 第25页 |
| 6.放射性核素 | 第25页 |
| (二) 实验方法 | 第25-36页 |
| 1.实验路线图 | 第25-26页 |
| 2.质粒构建 | 第26-29页 |
| ·聚乙二醇(PEG)法回收DNA片段 | 第26页 |
| ·DNA片段3’端凹陷的补平 | 第26页 |
| ·DNA片段3’端突出的削平 | 第26页 |
| ·载体的脱磷酸化 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·感受态大肠杆菌细胞制备 | 第27页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第28页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第28页 |
| ·荧光测序 | 第28-29页 |
| 3.细胞培养 | 第29-30页 |
| ·细胞培养 | 第29页 |
| ·G418溶液配制 | 第29页 |
| ·细胞传代及冻存 | 第29页 |
| ·细胞复苏 | 第29-30页 |
| 4.细胞转染 | 第30-31页 |
| ·电穿孔法转染 | 第30页 |
| ·DOTAP介导的基因转染 | 第30-31页 |
| ·磷酸钙介导的基因转染 | 第31页 |
| 5.基因组DNA提取及Southern印迹分析 | 第31-34页 |
| ·提取基因组DNA | 第31-32页 |
| ·Southern印迹分析 | 第32-34页 |
| ·酶解 | 第32页 |
| ·电泳 | 第32页 |
| ·Southern转移 | 第32页 |
| ·预杂交 | 第32-33页 |
| ·DNA探针标记 | 第33页 |
| ·杂交 | 第33-34页 |
| ·洗膜及放射自显影 | 第34页 |
| 6.PCR检测 | 第34页 |
| 7. 反向PCR克隆T转座子左臀旁侧序列 | 第34-36页 |
| ·反向PCR扩增转座子左臂旁侧序列 | 第34-35页 |
| ·改进的反向PCR扩增转座子左臂旁侧序列 | 第35-36页 |
| 第一部分实验结果 | 第36-49页 |
| 一.转座子载体的构建 | 第36页 |
| 二.转座子载体共转染哺乳动物细胞系 | 第36-40页 |
| 三.PCR及Southern blot分析 | 第40页 |
| 四.反向PCR检测转座子左臂的旁侧序列 | 第40-49页 |
| 第一部分讨论 | 第49-53页 |
| 第二部分：RNA／DNA寡核苷酸用于β地贫的靶向性基因治疗 | 第53-93页 |
| 第二部分前言 | 第53-61页 |
| 第二部分材料与方法 | 第61-67页 |
| 1.细胞系及细胞培养 | 第61页 |
| 2.寡核苷酸与转染试剂 | 第61页 |
| 3.质粒构建 | 第61页 |
| 4.基因转染 | 第61-63页 |
| ·电穿孔法转染 | 第61页 |
| ·脂质体介导的基因转染 | 第61-62页 |
| ·DOTAP介导的基因转染 | 第61-62页 |
| ·DMRIE-C介导的基因转染 | 第62页 |
| ·FuGENE 6~(TM)介导的基因转染 | 第62-63页 |
| ·PEI介导的基因转染 | 第63页 |
| 5.基因组DNA的提取 | 第63页 |
| 6.PCR扩增待检测片段 | 第63页 |
| 7.等位基因特异PCR检测RNA／DNA寡核酸的定点突变作用 | 第63-65页 |
| 8.寡核苷酸杂交检测RNA／DNA寡核酸的定点纠正作用 | 第65页 |
| 9.限制性内切酶多态性分析RNA／DNA寡核酸的定点突变作用 | 第65-66页 |
| 10.定点突变克隆的筛选 | 第66-67页 |
| 第二部分结果 | 第67-84页 |
| 一.质粒构建 | 第67页 |
| 二.电穿孔法转化MEL细胞 | 第67-68页 |
| 三.βE基因定点纠正的检测 | 第68-73页 |
| 四.Gγ基因调控序列的定点突变 | 第73-79页 |
| 五.定点突变克隆的筛选 | 第79-80页 |
| 六.Aγ-202 C位点的检测 | 第80-84页 |
| 第二部分讨论 | 第84-93页 |
| 1.β-地贫的靶向性基因治疗 | 第84-88页 |
| 2.RNA／DNA定点突变的检测方法 | 第88-89页 |
| 3.RNA／DNA定位突变的细胞特异性 | 第89-91页 |
| 4.嵌合体修复术的应用前景 | 第91-93页 |
| 小结 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-108页 |
| 文献综述 | 第108-116页 |
| 英文名词及缩写 | 第116-117页 |
| 个人简历 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
