间日疟原虫DNA文库的构建和克隆筛选及其用于疟疾基因诊断的研究
| 英文缩写词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 文献回顾 | 第13-30页 |
| 一、疟原虫DNA文库构建的研究概况 | 第13-20页 |
| (一) 疟原虫基因组的特征 | 第13-14页 |
| (二) 目的DNA的制备和载体的选择 | 第14-16页 |
| (三) 疟原虫基因的克隆与筛选 | 第16-18页 |
| (四) 疟原虫特异性DNA片段的筛选 | 第18-20页 |
| 二、疟原虫核酸探针的制备与应用 | 第20-30页 |
| (一) 疟原虫核酸探针的制备 | 第20-23页 |
| (二) 用核酸探针诊断疟疾 | 第23-28页 |
| (三) 用核酸探针鉴别疟原虫株 | 第28-30页 |
| 前言 | 第30-32页 |
| 第一部分 间日疟原虫DNA文厍的构建及克隆筛选 | 第32-51页 |
| 实验材料 | 第32-34页 |
| 实验方法 | 第34-42页 |
| (一) 间日疟原虫的采集与分离 | 第34-35页 |
| (二) 间日疟原虫基因组DNA的提取 | 第35页 |
| (三) 质粒DNA的提取 | 第35-38页 |
| (四) 质粒DNA的纯化 | 第38页 |
| (五) DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| (六) 间日疟原虫基因组DNA的部分酶切 | 第38-39页 |
| (七) 质粒DNA的酶切与制备 | 第39页 |
| (八) DNA酶切片段的回收 | 第39页 |
| (九) 质粒线性载体的去磷酸化 | 第39-40页 |
| (十) 感受态细胞的制备 | 第40页 |
| (十一) DNA的连接和转化 | 第40页 |
| (十二) ~(32)P-DNA探针的制备 | 第40-41页 |
| (十三) 菌落原位杂交 | 第41-42页 |
| 实验结果 | 第42-49页 |
| (一) 间日疟原虫的分离及其DNA提取 | 第42-44页 |
| (二) 质粒DNA的提取和酶切 | 第44页 |
| (三) 间日疟原虫基因组DNA的部分酶切和克隆 | 第44页 |
| (四) 间日疟原虫DNA克隆的筛选 | 第44-49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 第二部分 间日疟原虫DNA克隆的鉴定与分析 | 第51-60页 |
| 材料和方法 | 第51-54页 |
| (一) 实验材料 | 第51页 |
| (二) 细菌培养 | 第51页 |
| (三) 质粒DNA的提取和酶切鉴定 | 第51-52页 |
| (四) M_(13)噬菌体双链DNA的制备 | 第52页 |
| (五) M_(13)噬菌体的重组与鉴定 | 第52页 |
| (六) M_(13)噬菌体单链DNA的制备 | 第52页 |
| (七) Southern blot分析 | 第52-53页 |
| (八) DNA序列测定 | 第53-54页 |
| (九) DNA序列数据的微机处理 | 第54页 |
| 实验结果 | 第54-55页 |
| (一) 间日疟原虫DNA重组质粒的酶切鉴定 | 第54-55页 |
| (二) Southern blol分析 | 第55页 |
| (三) DNA序列分析 | 第55页 |
| 讨论 | 第55-60页 |
| 第三部分 用重组DNA探针检测间日疟原虫 | 第60-71页 |
| 材料和方法 | 第60-62页 |
| (一) 实验材料 | 第60页 |
| (二) 常规基因工程操作技术 | 第60页 |
| (三) ~(32)p标记探针的打点杂交 | 第60-61页 |
| (四) 生物素标记探针的制备 | 第61页 |
| (五) 生物素标记探针的打点杂交 | 第61-62页 |
| 实验结果 | 第62-66页 |
| (一) ~(32)P标记探针诊断间日疟的反应性 | 第62-66页 |
| 1、杂交敏感性 | 第62页 |
| 2、杂交特异性 | 第62-63页 |
| 3、与镜检符合率 | 第63-66页 |
| (二) 生物素标记探针检测间日疟原虫的反应性 | 第66页 |
| 1、显色灵敏度 | 第66页 |
| 2、杂交敏感性 | 第66页 |
| 3、杂交特异性 | 第66页 |
| 讨论 | 第66-71页 |
| 总结 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
