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埃博拉病毒和马尔堡病毒NP的表达和抗体制备

中文摘要第1-7页
Abstract第7-12页
英文缩略词表第12-13页
第一部分 文献综述第13-32页
 1 前言第13-14页
 2 流行病学第14-16页
   ·病原发现历史、分类和地理格局第14-15页
   ·自然宿主和传播方式的研究进展第15-16页
 3 临床与病理学研究第16-17页
   ·临床表现第16-17页
   ·实验室病理学变化研究第17页
 4 发病机理的研究进展第17-22页
   ·发病机理研究动物模型的建立第17-18页
   ·感染途径的研究进展第18-19页
   ·靶细胞和靶组织的研究发现第19-22页
     ·靶细胞第19-20页
     ·靶器官第20-22页
 5 机体病原应答机制研究第22-24页
   ·宿主免疫反应第22-23页
   ·血凝故障第23-24页
 6 诊断与治疗方法的研究进展第24-25页
   ·诊断方法的研究进展第24页
     ·临床诊断第24页
     ·实验室诊断第24页
   ·临床诊断的障碍第24-25页
 7 疾病患者处理与治疗第25-28页
   ·病例管理第25页
   ·目前的治疗方法第25-26页
   ·研究中的治疗方法第26-28页
     ·RNA 途经治疗第26页
     ·凝血治疗方法的研究第26-27页
     ·暴露后预防性治疗方法研究第27页
     ·治疗方法研究前景第27-28页
 8 预防第28-29页
   ·研究埃博拉病毒疫苗的意义第28页
   ·目前疫苗研究进展第28-29页
   ·目前疫苗研究现状思考第29页
 9 埃博拉病毒研究进展总结性思考第29-30页
 10 本实验的研究目的、意义和创新点第30-32页
   ·本实验的研究意义第30页
   ·本实验的研究目的第30-31页
   ·本实验的创新点第31-32页
第二部分 实验部分第32-63页
 实验一 埃博拉扎伊尔型病毒和马尔堡病毒 NP 基因在杆状病毒表达系统的表达及反应原性鉴定第32-39页
  1 材料与方法第33-35页
   ·目的基因、血清第33页
   ·BAC -TO-BAC 杆状病毒表达系统第33页
   ·重组杆状病毒的构建第33-34页
   ·、重组 NP 蛋白的表达第34页
   ·重组蛋白的反应原性鉴定第34-35页
     ·Western blot第34页
     ·间接免疫荧光第34-35页
  2 结果第35-37页
   ·重组载体 pFastbacHT-EBOV-Z 和 pFastbacHT - MARV 的构建第35页
   ·重组杆状病毒载体构建第35-36页
   ·昆虫细胞的转染第36页
   ·重组蛋白的反应原性鉴定结果第36-37页
     ·Western blot 鉴定重组 EBOV 和 MARV NP 蛋白[15]第36-37页
     ·间接免疫荧光第37页
  3 讨论第37-38页
  4 小结第38-39页
 实验二 原核表达埃博拉病毒 NP 的纯化、大鼠多抗的制备及单克隆抗体的筛选第39-63页
  1 实验材料和方法第39-56页
   ·细胞、菌株、动物与基因第39页
   ·抗体、常用酶、培养基等主要生化试剂第39-41页
   ·实验室主要仪器第41-42页
   ·实验相关试剂的配制第42-45页
     ·与免疫印记法有关的试剂配制第42页
     ·与 ELISA 实验有关试剂的配制第42-43页
     ·与杂交瘤细胞培养有关试剂的配制第43页
     ·与蛋白纯化柱有关试剂的配制:第43页
     ·与培养大肠杆菌(BL21(DE3))有关试剂的配制第43-44页
     ·与 SDS-PAGE 考马斯亮蓝染色有关的试剂配制第44-45页
   ·实验方法第45-56页
     ·已得质粒的提取与酶切验证第45-47页
     ·所得质粒的酶切验证与基因测序验证第47-48页
     ·验证成功的质粒转化 BL-21(DE3)感受态细胞第48-49页
     ·原核表达和纯化第49-52页
     ·大鼠多抗的制备第52-54页
     ·单克隆抗体细胞的筛选第54-56页
  2 实验结果第56-61页
   ·原核表达与纯化结果第56-58页
     ·原核表达质粒酶切验证结果和测序结果第56-57页
     ·四种亚型埃博拉病毒和马尔堡病毒 NP 重组蛋白的表达 SDS-PAGE 验证结果第57页
     ·纯化的表达蛋白的 SDS-PAGE 验证结果第57-58页
     ·纯化蛋白浓度测定与储存第58页
   ·大鼠多抗制备结果第58-59页
     ·抗四种亚型重组蛋白和抗马尔堡病毒重组蛋白的大鼠血清 WB 验证结果第58-59页
     ·血清的效价的 ELISA 测定结果第59页
   ·单克隆抗体筛选结果第59-61页
     ·单抗细胞上清的间接 ELISA 检测结果第59-60页
     ·单抗细胞上清的 WB 验证结果第60页
     ·单抗细胞上清的 IFA 验证结果第60-61页
  3 讨论第61-62页
  4 小结第62-63页
结论第63-64页
参考文献第64-73页
致谢第73-74页
作者简介第74页

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