中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
英文缩略词表 | 第12-13页 |
第一部分 文献综述 | 第13-32页 |
1 前言 | 第13-14页 |
2 流行病学 | 第14-16页 |
·病原发现历史、分类和地理格局 | 第14-15页 |
·自然宿主和传播方式的研究进展 | 第15-16页 |
3 临床与病理学研究 | 第16-17页 |
·临床表现 | 第16-17页 |
·实验室病理学变化研究 | 第17页 |
4 发病机理的研究进展 | 第17-22页 |
·发病机理研究动物模型的建立 | 第17-18页 |
·感染途径的研究进展 | 第18-19页 |
·靶细胞和靶组织的研究发现 | 第19-22页 |
·靶细胞 | 第19-20页 |
·靶器官 | 第20-22页 |
5 机体病原应答机制研究 | 第22-24页 |
·宿主免疫反应 | 第22-23页 |
·血凝故障 | 第23-24页 |
6 诊断与治疗方法的研究进展 | 第24-25页 |
·诊断方法的研究进展 | 第24页 |
·临床诊断 | 第24页 |
·实验室诊断 | 第24页 |
·临床诊断的障碍 | 第24-25页 |
7 疾病患者处理与治疗 | 第25-28页 |
·病例管理 | 第25页 |
·目前的治疗方法 | 第25-26页 |
·研究中的治疗方法 | 第26-28页 |
·RNA 途经治疗 | 第26页 |
·凝血治疗方法的研究 | 第26-27页 |
·暴露后预防性治疗方法研究 | 第27页 |
·治疗方法研究前景 | 第27-28页 |
8 预防 | 第28-29页 |
·研究埃博拉病毒疫苗的意义 | 第28页 |
·目前疫苗研究进展 | 第28-29页 |
·目前疫苗研究现状思考 | 第29页 |
9 埃博拉病毒研究进展总结性思考 | 第29-30页 |
10 本实验的研究目的、意义和创新点 | 第30-32页 |
·本实验的研究意义 | 第30页 |
·本实验的研究目的 | 第30-31页 |
·本实验的创新点 | 第31-32页 |
第二部分 实验部分 | 第32-63页 |
实验一 埃博拉扎伊尔型病毒和马尔堡病毒 NP 基因在杆状病毒表达系统的表达及反应原性鉴定 | 第32-39页 |
1 材料与方法 | 第33-35页 |
·目的基因、血清 | 第33页 |
·BAC -TO-BAC 杆状病毒表达系统 | 第33页 |
·重组杆状病毒的构建 | 第33-34页 |
·、重组 NP 蛋白的表达 | 第34页 |
·重组蛋白的反应原性鉴定 | 第34-35页 |
·Western blot | 第34页 |
·间接免疫荧光 | 第34-35页 |
2 结果 | 第35-37页 |
·重组载体 pFastbacHT-EBOV-Z 和 pFastbacHT - MARV 的构建 | 第35页 |
·重组杆状病毒载体构建 | 第35-36页 |
·昆虫细胞的转染 | 第36页 |
·重组蛋白的反应原性鉴定结果 | 第36-37页 |
·Western blot 鉴定重组 EBOV 和 MARV NP 蛋白[15] | 第36-37页 |
·间接免疫荧光 | 第37页 |
3 讨论 | 第37-38页 |
4 小结 | 第38-39页 |
实验二 原核表达埃博拉病毒 NP 的纯化、大鼠多抗的制备及单克隆抗体的筛选 | 第39-63页 |
1 实验材料和方法 | 第39-56页 |
·细胞、菌株、动物与基因 | 第39页 |
·抗体、常用酶、培养基等主要生化试剂 | 第39-41页 |
·实验室主要仪器 | 第41-42页 |
·实验相关试剂的配制 | 第42-45页 |
·与免疫印记法有关的试剂配制 | 第42页 |
·与 ELISA 实验有关试剂的配制 | 第42-43页 |
·与杂交瘤细胞培养有关试剂的配制 | 第43页 |
·与蛋白纯化柱有关试剂的配制: | 第43页 |
·与培养大肠杆菌(BL21(DE3))有关试剂的配制 | 第43-44页 |
·与 SDS-PAGE 考马斯亮蓝染色有关的试剂配制 | 第44-45页 |
·实验方法 | 第45-56页 |
·已得质粒的提取与酶切验证 | 第45-47页 |
·所得质粒的酶切验证与基因测序验证 | 第47-48页 |
·验证成功的质粒转化 BL-21(DE3)感受态细胞 | 第48-49页 |
·原核表达和纯化 | 第49-52页 |
·大鼠多抗的制备 | 第52-54页 |
·单克隆抗体细胞的筛选 | 第54-56页 |
2 实验结果 | 第56-61页 |
·原核表达与纯化结果 | 第56-58页 |
·原核表达质粒酶切验证结果和测序结果 | 第56-57页 |
·四种亚型埃博拉病毒和马尔堡病毒 NP 重组蛋白的表达 SDS-PAGE 验证结果 | 第57页 |
·纯化的表达蛋白的 SDS-PAGE 验证结果 | 第57-58页 |
·纯化蛋白浓度测定与储存 | 第58页 |
·大鼠多抗制备结果 | 第58-59页 |
·抗四种亚型重组蛋白和抗马尔堡病毒重组蛋白的大鼠血清 WB 验证结果 | 第58-59页 |
·血清的效价的 ELISA 测定结果 | 第59页 |
·单克隆抗体筛选结果 | 第59-61页 |
·单抗细胞上清的间接 ELISA 检测结果 | 第59-60页 |
·单抗细胞上清的 WB 验证结果 | 第60页 |
·单抗细胞上清的 IFA 验证结果 | 第60-61页 |
3 讨论 | 第61-62页 |
4 小结 | 第62-63页 |
结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
作者简介 | 第74页 |